壮药黄花调气饮的质量控制分析

　　壮药黄花调气饮为刘华钢教授根据民间验方，运用壮医独特的调气机，通三道治疗原则和临床诊疗经验研制而成的茶剂，该制剂现正在进行制剂注册申请。制剂处方由黄茂、山银花、大枣、浮小麦、甜茶组成，生产工艺为取黄茂、浮小麦、大枣加水煎煮2次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成清膏后，加入山银花、甜茶粗粉，烘干，粉碎成粗粉，制成袋泡茶。其具有顺气解毒、调气补虚的功用，可通调气道，顺气解毒，用于四时感冒，尤以虚人感冒、老人感冒、小儿感冒更宜。为了控制制剂质量，对处方中黄茂、山银花、甜茶进行薄层色谱（thinlayerchromatographyTLC）法鉴别，并采用高效液相色谱（highperformanceliquidchromatographyHPLC）法测定制剂中山银花的有效成分绿原酸。所建立的方法具有较好的分离度、重复性、专属性，且操作简便准确，可以有效地控制壮药黄花调气饮的质量。
　　1仪器与试药
　　1。1仪器岛津高效液相色谱仪（包括LC20A元泵，SIL20A标准自动进样器，SPD20A紫外二可见检测器，CTO20A柱温箱，CBM20A工作站）；SartoriusBP211D电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；SK2200LHC超声波清洗机（上海科导超声仪器有限公司）；Agilent8453紫外河见分光光度计（美国安捷伦）；LG16W高速离心机（北京医用离心机厂）；硅胶G板、聚酞胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）。
　　1。2试药黄茂对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：20120502）；绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110753X00413）；甜茶对照药材（南宁生源中药饮片有限责任公司，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为蔷薇科植物甜叶悬钩子RubussuavissimusS。Lee的干燥叶，批号：100201）；甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）；水为超纯水，其余试剂为分析纯。壮药黄花调气饮（批号：20110605，20110610，20110614）由广西中医药大学附属瑞康医院制剂室生产。
　　2TLC鉴别
　　2。1山银花取本品0。5g，加甲醇10mL，超声处理30min滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺山银花的阴性对照样品0。59，同法制成阴性对照溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述溶液各2L分别点于同一聚酞胺薄膜上，以36乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（波长365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。缺山银花阴性样品无相应斑点。见图to2。2黄茂取本品3。5g，加甲醇30mL，超声处理1h，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100200目，10g，内径为10mm）上，用40甲醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺黄茂的阴性对照样品3。59，同法制成阴性对照溶液。再取黄茂对照药材3g，加甲醇30mL，超声处理1h，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100200目，5g，内径为10mm）上，从用40甲醇100mL洗脱起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述溶液各510L分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酷（5：5）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外灯光（波长365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
　　2。3甜茶取本品1。0g，加甲醇10mL，超声处理30min滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺甜茶的阴性对照样品1。0g，同法制成阴性对照溶液。再取甜茶对照药材0。59，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述溶液各510L分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷色酸乙酷一甲酸（8：2：0。4）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯光（波长365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
　　3HPLC法测定山银花中绿原酸
　　3。1色谱条件Ultimate色谱柱（250mmx4。6mm，5用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水冰醋酸（20：80：1）为流动相；柱温30；检测波长327nm；流速1。0mLmin；进样量10L。
　　3。2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，制成每毫升含绿原酸70g。
　　3。3供试品溶液的制备取本品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50甲醇25mL，密塞，称定质量，超声处理30min，放冷，再称定质量，用50甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，置25mL棕色瓶中，加50甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　3。4阴性样品溶液的制备分别按处方比例及制剂制备工艺制备不含山银花的阴性样品，再按3。3项下方法制备，即得。
　　3。5专属性实验取阴性样品溶液、对照品溶液和样品溶液，按照3。1项下色谱条件，注入高效液相色谱仪，进样量10L，阴性溶液在绿原酸色谱峰处无干扰峰出现，表明对被测成分无干扰。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。
　　3。6线性关系考察精密称取绿原酸对照品1。77mg置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成浓度为70。8gmL的绿原酸对照品溶液，取上述绿原酸对照品溶液分别进样2，4，6，8，10，12，14L记录绿原酸峰面积值。以对照品进样量（g）为横坐标（X），对应峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程Y3。2x106X22423（r0。9999），结果表明绿原酸进样量在0。14160。9912g范围内与峰面积呈良好线性关系。
　　3。7精密度实验取同一供试品溶液，按3。1项下色谱条件，连续进样6次，进行分析测定绿原酸峰面积值，计算绿原酸含量RSD值为0。35。
　　3。8稳定性实验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12h进样，进样量为10L，分别测定其峰面积值，RSD0。37（n7），表明供试品溶液在12h内稳定，
　　3。9重复性实验取同一供试品，按3。3项下方法重复提取6份作为供试品溶液，按3。1项色谱条件进行测定，记录绿原酸峰面积，求出其含量，计算RSD值为0。25（n6）。
　　3。10加样回收率实验精密称取己知含量的样品6份，每份约0。5g，分别精密加入4。29mgmL绿原酸对照品溶液1mL，按3。3项下方法制备供试品，按照3。1项下色谱条件分别进样，进样量10L，测定峰面积，绿原酸的加样回收率为102。2，RSD为0。68。
　　3。11样品测定按上述色谱条件测定3批制剂中绿原酸含量，每批制剂测3份，平均含量分别为8。01，7。90，7。92mgg。
　　4讨论
　　笔者曾对制剂中另二味药大枣、浮小麦进行过薄层鉴别，结果在与对照药材色谱相应位置上，有相同颜色的荧光斑点，但阴性对照存在干扰，大枣和浮小麦的薄层鉴别不宜作为壮药黄花调气饮的薄层鉴别项目。
　　根据文献报道，绿原酸对照品溶液在327nm波长处有最大吸收。取绿原酸对照品的甲醇溶液，在紫外分光光度计上进行扫描，测得最大吸收波长为327nm，与文献报道相吻合，故本实验采用327nm为检测波长。
　　笔者曾试用流动相：乙腈0。4磷酸溶液（13：87），甲醇水冰醋酸（15：85：1），甲醇水冰醋酸（25：75：1），甲醇水冰醋酸（20：80：1）。实验条件摸索证实，采用流动相甲醇水冰醋酸（20：80：1）时，样品中绿原酸与其他杂质峰分离较好，并能在15min内出峰完毕，达到分析要求，故选择甲醇水冰醋酸（20：80：1）为流动相。
　　笔者比较25，30，35柱温对高效液相色谱的影响，实验发现，柱温对绿原酸峰的分离度和保留时间影响不大，因此选择较接近室温的柱温30。