关于制作脑组织冷冻切片方法的改良

　　冷冻切片就是新鲜标本借助低温( - 18 ) ，使组织在短时间内达到一定硬度进行快速切片、染色的一种制片方法。冷冻切片有着制片快速、切片较薄、染色佳等优点，在各级医院病理科实验室广泛使用，但要在短时间内制作出高质量的冷冻切片难度较大，尤其是制作高质量的脑组织冷冻切片难度更大。现就我科制作脑组织冷冻切片的方法介绍如下。
　　1 材料与方法
　　1. 1 材料选取我院2012-012013-12 间送检冷冻切片的脑组织标本148 例。德国Leica CM1900 冷冻切片机，日本产Feather 一次性刀片，医用耦合剂，甲醇、Gill 改良苏木精染液、醇溶性伊红、梯度乙醇和二甲苯等试剂。
　　1. 2 方法①根据所取组织的大小在组织托上滴加适量的医用耦合剂; ②将组织块平放于包埋剂上并用冷冻锤轻压组织30 s，使组织迅速达到较低温度以防冰晶的形成，切片机冻头温度控制在- 14    - 16 为宜; ③切片时用力均匀，厚度8 m，用常温载玻片粘贴后放入甲醇中固定1 min;④放入Gill 改良苏木精染色1 min，水洗后直接用温水( 45 左右) 返蓝，伊红染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。整个过程需时5   7 min。
　　2 结果
　　148 例脑组织冷冻切片完整，厚薄均匀，无皱褶刀痕，组织结构清晰，核、浆着色鲜艳，透明度较好，接近常规HE 切片，极少出现影响诊断的因素，准确率 99%。图1 脑组织冷冻切片，组织结构清晰，颜色鲜艳，透明度好,细胞结构清楚，核浆着色分明.
　　3 讨论
　　脑组织冷冻切片要求制片快速，冷冻温度准确，防止冰晶出现和细胞肿胀。特别是脑组织含水较丰富、质地较软、结构疏松等特点，制作高质量的冷冻切片难度较大，在制片过程中应注意以下几个方面: ①脑组织冷冻切片出现冰晶的主要原因是没有迅速将组织冷冻到合适温度。其形成机制主要有: 一是蛋白质和水所形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来形成冰晶; 二是人体细胞大约含有30%   40% 水分，水在4 时体积最小，冷却至零度以下时水结成冰，体积增大。冰晶形成后细胞形态发生改变，当冰晶融化后，镜下可见原组织被挤压变形，留下大小不一、形态不定的空隙。笔者采用冷冻锤轻压组织，使组织块上下两面同时冷冻，达到迅速冷冻组织的目的。而冷冻切片机冻头温度控制在- 14   - 16 较为适宜，过低易造成组织过硬、变脆，影响切片质量; 其次，送检标本要避免用生理盐水纱布包裹，取材刀、镊子等不易粘水取材。②固定是冷冻切片的关键，要选用甲醇作为脑组织冷冻切片的固定液。甲醇具有固定时间短、细胞收缩小、对细胞核和抗原保存较好的特点。经甲醇充分固定的脑组织结构清晰，核浆对比鲜明，基本能保持组织的形态结构。在以往的脑组织冷冻切片染色中，存在苏木精染色时间过长的现象，多采用温水水浴加热苏木精染液或将苏木精染液放入恒温烤箱等方法; 而笔者采用配制Gill 苏木精染液时，将硫酸铝钾水溶液适当加温，同时碘酸钠也可增加30% 的量，这样配制的苏木精染液较成熟些，适合冷冻切片染色。而苏木精染色后直接用温水返蓝，不用盐酸乙醇分化，既节省时间，也避免了因分化控制不好而引起染色出现问题，同时直接用温水返蓝后的细胞核更蓝，染色质清晰、核浆鲜明。
　　总之，在脑组织冷冻切片过程中有很多因素可影响制片质量，这就要求病理技术人员有高度的责任心，对制片的各个环节和脑组织的特性有充分的认识和掌握，注意制片细节，在日常的工作中不断摸索、总结和改进，不断缩小冷冻切片与常规石蜡切片的差距，为正确诊断提供保障。