梗阻性黄疸胆汁中胆管脱落细胞研究

　　毕业论文            作者：蔡磊 曲强 何小东 周立 张晋夏
　　【关键词】  胆管脱落细胞； 胆管癌； 胆管结石； 梗阻性黄疸
　　【Key words】  Biliary cells;  Cholangiocarcinoma;  Cholangiolithiasis;  Obstructive jaundice
　　梗阻性黄疸在外科临床上常见。胆管结石和胆管癌是导致梗阻性黄疸的主要病因。经胆汁引流进行胆管脱落细胞的细胞学检查，是近年来逐渐开展的诊断技术。多种非手术获取细胞方法已被应用，如经PTCD、ERCP引流胆汁或同时采用细胞刷取、组织钳夹等技术［1］。但是，受胆汁引流量较少或操作技术限制，目前对病理状态下胆管脱落细胞数量和形态缺乏整体认识， 细胞学诊断鉴别良恶性病变敏感性和稳定性较差。本研究在改进胆汁收集方法基础上， 比较胆管结石和胆管癌胆汁中脱落细胞特征，为进1步认识胆管病变过程中胆管上皮细胞形态，在细胞和分子生物学水平研究胆管恶性肿瘤发生提供新思路。
　　1  材料与方法
　　1.1  1般资料
　　1.3  胆管脱落细胞的染色和观察
　　重悬细胞至1 ml PBS平衡液中，移至加有载玻片和滤纸的细胞沉淀仪内，4  冰箱过夜，自然干燥，用4  丙酮固定细胞10 min。瑞 姬双染法进行染色：细胞固定好后加入瑞 姬双染料混合物A液(Baso公司)3滴，染色3 min，再加染料缓冲液B液6滴，充分混匀后，染色3 min，自来水冲洗玻片1 min，干燥后封片。涂片及染色后细胞在Nikon Eclips 80显微镜下观察，经Nikon CCD(DS 5M U
　　1)采集系统收集记录。
　　1.4  统计学分析
　　胆管癌和胆管结石胆汁中脱落细胞离心后分别计数，两组细胞数以 s表示，组间均数比较采用ANOVA方法(SPSS 11.0软件处理)。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2  结果
　　瑞 姬双染法染色显示胆管癌胆汁中脱落细胞呈嗜碱性，体积大，成团聚集，视野中可见大量异形细胞。核质比失调，细胞核呈浓染，核质染色不均伴有核内空泡形成，核仁肥大且数量多少不等，核膜增厚明显，具有癌细胞特征(图1C)。胆管结石胆汁中脱落细胞体积较小，染色呈嗜酸性，核质比正常，细胞核着色均1，未见异常分裂象，与胆管癌的脱落细胞形态结构明显不同(图1D)。
　　3  讨论
　　胆管癌是起源于胆管上皮的恶性肿瘤，确诊时多为晚期，手术切除率低，预后差。目前胆管癌的病因尚未明确，已经发现的胆管癌致病危险因素包括原发性硬化性胆管炎、肝血吸虫病、先天性胆管囊肿、肝内胆管结石、胆管损伤和丙型肝炎等。 Yeh等［2］发现胆管腔内胆管癌的形成可能经历下列阶段，即肝内胆管结石、胆管上皮细胞不典型增生和原位或微小浸润癌。因此，胆管结石或慢性炎症所导致的胆管上皮不典型增生可能是胆管癌的癌前病变。但是，由于胆管在体内的解剖位置特殊，目前研究多取自手术切除标本。如能在术前获取胆管上皮细胞，不但有助于胆管疾病的诊断和鉴别，更对胆管恶性肿瘤发生、发展的动态检测，以及在细胞和分子生物学水平上深入认识胆管癌病因具有重要意义。
　　近年来的蛋白和基因表达研究显示，部分生理情况下不表达或极少表达于胆管上皮的基因和相应蛋白，如黏蛋白、3叶肽和同源异型框蛋白等，在结石、胆管异形性上皮细胞乃至胆管癌时有异常表达［5-8］。这提示胆管结石及胆管上皮长期炎症具有癌变倾向或在1定程度上需与癌前病变相鉴别。本研究建立的有效收集胆管脱落细胞的方法，1方面可以成为胆管癌早期诊断的依据，同时也是在细胞和分子生物学水平探讨胆管癌发生机制的途径。
　　【参考文献】
　　［2］ Yeh TS, Tseng JH, Chen TC, et al. Characterization of intrahepatic cholangiocarcinoma of the intraductal growth type and its precursor lesions. Hepatology,2005,42
　　(3):657-664.
　　［4］ Govil H, Reddy V, Kluskens L, et al. Brush cytology of the biliary tract: retrospective study of 278 cases with histopathology correlation. Diagn Cytopathol,2002,26
　　(5):273-277.
　　［8］ Bamrungphon W, Prempracha N, Bunchu N, et al. A new mucin antibody/enzyme linked lectin sandwich assay of serum MUC5AC mucin for the diagnosis of cholangiocarcinoma. Cancer Lett,2007,247
　　(2):301-308.