毕业论文 作者：陈莉萍 戴睿武 郭毅斌 王曙光 董家鸿＂ 【关键词】 雷帕霉素； 肝移植； 冷保存； 再灌注； 胆管上皮细胞； 增殖 【Key words】 Rapamycin; Liver transplantation; Cold preservation; Reperfusion; Biliary epithelial cells; Proliferation 1 材料与方法 1.1 主要试剂与仪器 兔抗增殖细胞核抗原多克隆抗体、鼠抗p STAT3 tyr705单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司；ChemMateTM Envision免疫组化试剂盒为丹麦Dako公司产品；RPM为美国惠氏百宫制药公司惠赠。 1.3 各组术后生存分析 1.4 肝功能指标检测 1.5 兔抗增殖细胞核抗原、α 平滑肌肌动蛋白免疫组织化学检测 肝组织常规固定、包埋、切片。采用兔抗增殖细胞核抗原作为细胞增殖期G1 S期的评价指标，α 平滑肌肌动蛋白作为肌纤维母细胞标志。按Chem MateTM Envision免疫组化试剂盒说明书操作。显微镜下观察α 平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞的胞质呈棕色，增殖细胞的胞核呈棕色。计算7个高倍镜( 400)视野内，每100个胆管细胞中增殖的胆管上皮细胞所占比例的均值作为该样本的胆管上皮细胞增殖率［4］。 1.6 统计学分析 计量资料以 s表示，所有数据应用SPSS 10.0软件进行统计分析，多组均数间的比较采用单因素方差分析，采用Kaplan Meier法绘制生存曲线，Log rank法检验各组生存率之间的差异。 2 结果 2.1 各组术后生存分析 冷保存12 h组生存率明显低于冷保存1 h组(P=0.017 4)，而与雷帕霉素组水平接近(P=0.89，图 1)。两组大鼠死亡的主要原因为移植肝肝功能不全，表现为肝脏淤血或伴有局灶性坏死，腹水、黄疸，肝功能酶谱升高，部分死亡大鼠胆管内可见褐色胆泥形成。 图1 各组肝移植术后生存曲线 2.2 各组肝功能检测 2.3 各组胆管上皮细胞增殖 2.4 胆管周围肌纤维母细胞分布 图2 肝移植术后胆管上皮细胞增殖(红色箭头所示为增殖细胞) (2氨基联苯胺染色 400) 图3 肝移植术后肌纤维母细胞分布(红色箭头所示为肌纤维母细胞) (2氨基联苯胺染色 400) 3 讨论 残存的胆管上皮细胞在对损伤做出再生修复时，虽然最终能恢复到近似原先的细胞形态，但在该过程中极有可能经历DNA损伤或基因序列改变，具有和正常细胞不同的功能，分泌多种与器官纤维化密切相关的细胞因子如TGF β等，促进胆管周围成纤维细胞活化转化为肌纤维母细胞，而后者的持续出现是器官纤维化过程的关键［6］。同时，大量而活跃的细胞分裂需要消耗较多的能量，就有可能削弱肝内非新生细胞正常的能量代谢过程［7］。这对移植物的长期存活及功能是不利的。我们观察到伴随着明显的胆管上皮细胞增殖，较多肌纤维母细胞环绕于冷保存12 h组胆管周围。这表明严重冷保存 再灌注诱导的胆管上皮细胞增殖可能是促进肌纤维母细胞聚集的重要因素。由于胆管上皮细胞和胆管周围肌纤维母细胞之间维持着非常精妙的平衡，冷保存 再灌注对胆管上皮细胞的严重损伤触发肌纤维母细胞的大量活化，导致胆管壁创面收缩，增加了胆管壁及其周围组织纤维化和胆管狭窄形成的风险，在肝外胆管或肝内大胆管常表现为管腔狭窄，在小胆管则可能出现管腔阻塞［8］。我们还观察到大胆管尤其肝门附近大胆管内壁的胆管上皮细胞增殖最为活跃，该区结缔组织丰富，内含大量成纤维细胞，极易受到胆管上皮细胞增殖的影响而活化为肌纤维母细胞。这也许正是临床观察到的肝门附近大胆管成为移植肝胆道狭窄易患部位的原因之1，也是影响移植物功能与存活的重要因素。 作为1种新型免疫抑制剂，体外和体内实验均证实雷帕霉素抑制胆管上皮细胞增殖，其有效抑制浓度远低于临床肝移植术后患者应用雷帕霉素作为免疫抑制剂时的血药浓度［9］。我们的研究也发现，雷帕霉素明显抑制由冷保存 再灌注损伤诱导的胆管上皮细胞增殖，并减少胆管周围肌纤维母细胞的聚集。雷帕霉素是信号转导及转录激活因子 3活化的特异性抑制剂，因而部分阻断转录激活因子 3介导的信号通路，从而调控细胞周期进展，影响细胞增殖与分化［10］，这可能是其抑制胆管上皮细胞增殖的分子机制之1。同时我们还观察到，雷帕霉素虽然明显抑制肝移植术后胆管上皮细胞的增殖，但并未降低术后14 d内生存率，进1步提示以胆管上皮细胞增殖为靶点的雷帕霉素极可能成为临床防治移植肝胆管周围纤维化、胆管狭窄等并发症的有力武器，将会更广泛地应用于肝移植领域。 【参考文献】 ［2］ Ramadori G, Saile B. Portal tract fibrogenesis in the liver. Lab Invest,2004,84 (2):153-159. ［4］ Alvaro D, Alpini G, Onori P,
我国企业对于大数据的运用变革1网络大数据的基本概念在我国互联网发展的初期，大数据的概念还没有完全地提炼出来，在2010年以后，随着我国互联网技术的不断发展和应用不断地扩大，在我国互联网应用的过程中，大数据的基大学生心理健康教育活动的问题及优化措施一大学生心理健康教育活动存在的问题（一）统筹安排不科学合理一是活动时间较短。心理健康教育活动的开展多集中在5。25心理健康节期间，多数心理健康教育活动举办的时间跨度不超过一个星期，在互联网时代背景下浅析大学生心理健康教育一互联网时代的内涵及特点2015年7月国务院印发的关于积极推进互联网行动的指导意见将互联网解释为把互联网的创新成果与经济社会各领域深度融合，推动技术进步效率提升和组织变革，提升实体对高中化学教学生活化的探讨一高中化学教学生活化的意义（一）高中化学教学生活化有利于学生对化学产生兴趣高中化学是不少学生眼中较难的学科，知识点繁杂难懂，化学方程式变化多样，难以捉摸，要背诵要记忆的内容也较多，数字逻辑电路基础课的教学体会1引言数字逻辑电路是电类专业重要的基础课程，是一门理论性和实践性都很强的课程。通过该课程的学习，希望学生能够具有一定分析问题和解决问题的能力，进一步希望学生能有设计电路的能力。但这浅谈一种安全高效的数据交换模型研究在数字校园的建设过程中，信息孤岛是必须要解决的问题。解决信息孤岛的主要思路有2种模式数据大集中模式和数据交换模式。数据大集中模式需要推倒所有原有系统重新建设，实现难度非常大，现实应网络传媒对低年级大学生看待公共事件态度的实证研究网络传媒对低年级大学生看待公共事件态度的实证研究互联网的出现把人们带进了一个更为广阔的活动领域，电子信箱QQ论坛博客微博微信等产品，极大的影响了青年学生的信息获取与社交方式，以信息基于搜索引擎的SIVA网络营销理论模型的应用研究基于搜索引擎的ldquoSIVArdquo网络营销理论模型的应用研究信息技术的到来改变了营销环境，需要建立一种新的由消费者主导的交互市场营销体系。传统的以线性的输出营销系统，都是基百度搜索满意度和忠诚度影响因素实证研究百度搜索满意度和忠诚度影响因素实证研究1引言百度在国内率先采用了竞价排名这一赢利模式，百度竞价排名是指把企业的产品服务等通过关键词的形式在百度搜索引擎平台上进行推广，它是一种按效果高职生沉迷网络游戏的调查研究及心理因素探析1引言随着计算机和网络技术的快速发展，网络游戏得到了迅速的发展和普及。网络游戏作为以网络为平台的一种娱乐性活动，主要分为四类大型网络游戏休闲网络游戏对战游戏和网页游戏等1。中国互联网络文化对大学生消极影响的实证研究网络文化对大学生消极影响的实证研究1网络文化的涵义网络文化是指网络上的具有网络社会特征的文化活动及文化产品，是以网络物质的创造发展为基础的网络精神创造。网络是人类文明的划时代成果，