双柏凝胶剂中大黄素测定实验论文

　　1仪器与试药
　　1。1仪器高效液相色谱仪（日本岛津）：LC10ATvp双泵，SLC10Avp控制器，SPD10Avp紫外检测器，CTO10ASvp柱温箱。
　　1。2试药大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号为07569908）；甲醇为色谱纯；大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷由柳州市神农中药饮片厂提供，经柳州市中医院药检室鉴定，符合《中国药典》要求；其余试剂均为分析纯。
　　2方法与结果
　　2。1凝胶剂的制备取处方量的大黄（A）和根据双柏散处方比例称取药材粗粉（B），均加95乙醇浸泡6h，以57mlmin的速度渗漉提取，相应渗漉液浓缩至约50g，加入3g卡波姆940，密闭放置过夜使其充分溶胀，加蒸馏水至100g，研匀即得。分装于密闭避光的容器中，贮存于凉处。A：大黄凝胶；B：双柏凝胶
　　2。2建立测定方法
　　2。2。1色谱条件
　　色谱柱为选KromasilC18柱（5m，250mm4。6mm）；流动相为甲醇水（6：4）；流速1。0mlmin；检测波长254nm；柱温30；进样量：10l。
　　2。2。2对照品溶液制备
　　精密称取大黄素对照品5mg，加甲醇溶解定容至25ml，制成0。2mgml的溶液，即可。
　　2。2。3供试品溶液制备
　　精密称取凝胶剂1g，水浴浓缩至近干，加蒸馏水10ml，浓盐酸1ml，沸水浴中水解30min，再加氯仿20ml，超声振荡20min，置分液漏斗中分层，取氯仿层；水层用氯仿洗3次，每次10ml，合并氯仿液，挥干。加适量甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，超声振荡数分钟使溶解完全，加甲醇至刻度，摇匀。针孔式微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
　　2。2。4线性关系
　　考察精密吸取对照品溶液用流动相稀释成0。4，1。0，2。0，4。0，10。0gml1进样10l测定，以大黄素进样量（Y）和峰面积（X）进行线性回归，求得标准曲线的回归方程为：Y3300。3X1422，r0。9998。结果表明大黄素进样量在0。410gml1范围内有良好的线性关系。
　　2。2。5精密度实验
　　精密吸取上述对照品溶液10l，重复进样测定5次，结果大黄素峰面积值的。RSD0。59，表明仪器精密度良好。取供试品溶液，于0，1，2，3h分别进样测定峰面积，结果RSD0。42。表明供试品在3h内稳定。实验全部选择雄性昆明小鼠可便于取皮操作及结果数据的平行。同时以高效液相色谱法为离体鼠建立了可靠的体外测定方法，在渗透实验中，由于皮肤与介质长时间接触，皮肤中蛋白质等物质易脱落，溶解，会导致混浊或呈乳光，本文酸化样液以游离出脂溶性大黄素，然后氯仿提取，从而消除了皮肤中蛋白等成分对色谱柱的影响。