探究越鞠丸中不同工艺的栀子醇提物对小鼠的抗抑郁作用

　　越鞠丸为金元医家朱震亨创立的治疗郁证的代表方剂，最早出现于《丹溪心法卷三六郁五十二》中，全方由栀子、苍术、香附、川芎、神曲组成，开创了中医专方防治郁证之先河。栀子见于神农本经，为茜草科植物山栀的果实，性苦寒，无毒。入心、肝、肺、胃经。栀子的化学成分较为复杂，达100 多种。栀子从汉代延续至今，记载的炮制方法约有14 种之多，但临床上常用的为生栀子、炒栀子、焦栀子，中国药典1995 年版中收载的栀子加工炮制品也为上述3 种。前期试验研究结果显示，越鞠丸中栀子具有较强的抗抑郁作用。本文采用2 种行为绝望小鼠模型，对不同工艺的栀子进行了抗抑郁活性研究，为其活性部位筛选提供实验基础。
　　1 资料与方法
　　1. 1 实验动物
　　健康昆明种小鼠，48 只，体质量25   30 g，全雄，由上海实验研究所提供。编号scxy - ( 上海实验研究所) - 2012 - 004。
　　1. 2 实验药物
　　生栀子、炒栀子、焦栀子( 南京轩德堂提供生栀子、炒栀子、焦栀子，批号130702) 。不同工艺的栀子( 生、炒、焦) 各取100 g，放入药物打磨机打碎，置入1 L 烧杯中，加95%乙醇到1 L，放磁力搅拌机上浸泡12 h 后静置1 h 后取上层清液，此过程相同方法重复3 次。将3 次取得的上层清液过滤后放入旋转蒸发皿蒸发至200 mL 后放入56 的烘箱中烘3 h，保存备用。
　　1. 3 实验试剂和仪器
　　乙醇为国产分析纯( 纯度 99. 7%，批号为20130709) ; SHZ - Ⅲ循环水式真空泵( 南京科尔仪器设备有限公司) ; 旋转蒸发器RE - 52A( 上海亚荣生化仪器厂) ; 通用隔离箱( 上海吉量软件科技有限公司) 。
　　1. 4 方法
　　健康昆明种小鼠48 只，放置动物房( 25 2)  ，适应环境7 d，自由进食饮水，自然光照，普通饲料喂养，然后按体质量随机分为4 组，即CTL 组、生栀子组、炒栀子组、焦栀子组，每组12只。
　　采用慢性不可预知的温和性应激模型( CUMS) 进行造模，CUMS 抑郁模型的制作包括以下几种不同的应激因子: 昼夜节律的调整和光照性质的改变( 彻夜光照) 、食物饮水的调整、环境的改变( 鼠笼倾斜、潮湿垫料、束缚、异物) 、游泳。将几种不同的应激因子在实验全程中应用，使动物不能预料刺激的发生。具体安排如下: 第1 天，禁食、禁水，均持续24 h; 第2 天，空瓶、外来物体，分别持续1 h 及24 h; 第3 天，强迫游泳、彻夜光照，分别持续6 min、12 h; 第4 天，束缚、斜笼( 45) ，分别持续2 h 及7 h; 第5 天，禁食、湿笼，均持续24 h; 第6 天，禁水、彻夜光照，分别持续24 h 及12 h; 第7 天，空瓶、斜笼，分别持续1 h 及7 h。
　　造模28 d 后，CTL 组、生栀子组、炒栀子组、焦栀子给予组分别按体质量的1% 给予9% 生理盐水、4 g /kg 的生栀子醇提物、炒栀子醇提物、焦栀子醇提物灌胃。
　　2 结果
　　2. 1 小鼠悬尾实验( TST)
　　参照Steru 方法略有改动，将单个小鼠尾端( 距尾2 cm 处) 用胶布粘在悬挂钩上面，放入通用隔音箱内，使其成倒挂状态，头部离箱底20cm。小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间出现间断性不动，显示失望状态。
　　观察6 min，记录后4 min 内小鼠不动时间为失望时间。生理盐水作为阳性对照药，与生理盐水对照组比较，生栀子、炒栀子组均有趋势，其中焦栀子组具有显著性差异( P  0. 05) 。
　　2. 2 小鼠强迫游泳实验( FST)
　　参照Porsolt 方法略有改动。将单个小鼠放入水深5 L 烧杯中，水温( 2 5  2 )   ，观察6 min，记录后4 min 小鼠游泳的不动时间。不动指小鼠在水中停止挣扎，即显漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面。实验完将小鼠放回笼内。生理盐水作为阳性对照药，与生理盐水对照组比较，生栀子、炒栀子组均有趋势，其中焦栀子组具有显著性差异( P  0. 05) 。
　　3 讨论
　　由于抑郁症是一个包括了身体与心理异常的疾病，因此对抑郁症的动物模型争议非常大，所以抑郁模型的进一步研究显得尤为迫切。到目前为止，已有20 多种方法可以用作抑郁症动物模型的制备，可从生物学、遗传学、社会心理学等各角度来模拟抑郁症的表现。分为应激模型、神经生化功能改变模型、转基因动物模型、孤养或分养模型等。慢性不可预知的温和性应激模型( CUMS)主要模拟了人类抑郁的核心症状即快感的缺乏，同时模拟了其他重性抑郁障碍的症状表现，如运动能力及社会交往能力下降、侵犯攻击能力缺陷、探索行为能力下降、性行为能力下降等。CUMS 抑郁模型记录动物模型的抑郁并广泛用于了解抑郁症的病理生理机制。因为它有一个优势遗传模型在密切模仿人类抑郁症。此外，CUMS抑郁模型具有良好的效果，其潜在的三种类型相结合的有效准则如表面效度、结构效度和预测效度，符合抑郁症的动物模型的要求。CUMS 抑郁模型具有高度的有效性，并可持续几个月，是目前国外文献中广泛使用的模型。本实验中CUMS抑郁模型的小鼠变得激惹、开笼或触笼时有明显的攻击行为，对新异环境刺激反应淡漠。说明建立的模型有类似抑郁症的行为变化，也佐证了慢性应激抑郁小鼠模型的复制成功.