谈多目标同步优化黄马缓释喷雾膜剂的基质处方

　　黄马酊是重庆市中医研究院经典医院制剂，由酒黄连和制马钱子两味药材组成，具有疏通经络、活血止痛、解毒消肿、消淤散结的功效，临床上主要外用于血管栓塞性脉管炎（即中医脱疽）、疮痈、丹毒、褥疮等皮肤痒痛证的治疗。酊剂具有制备简单、释药迅速等优点，但有流动性大，含醇量高，对溃疡面具强烈刺激性，以及较短时间内需重复用药等缺点而影响其临床使用。本研究采用喷雾膜剂技术对黄马酊进行剂型改革。喷雾膜剂兼顾喷雾剂和膜剂的双重优点，既可呈雾状喷出，同时快速成膜，可有效保护溃疡面，减小刺激性并缓慢长效释放药物，携带方便，从而提高临床疗效及患者用药的顺应性。本研究采用正交设计，以PVA1788、乙醇和甘油用量为考察因素，以制剂的成膜性能、士的宁及盐酸小檗碱在8h内的累积释放率为综合评价指标，优选出膜剂的最佳基质配方，并对其体外释放及经皮渗透等作用进行考察。
　　1仪器与材料
　　1。1仪器
　　安捷伦1260高效液相色谱仪；DAD紫外检测器；AB204E型分析天平（瑞士梅特勒托利公司）；RYJ6A型药物透皮扩散试验仪（上海黄海药检仪器厂）；A0110mL喷雾瓶（陕西博迪塑胶有限责任公司）。
　　1。2试药
　　实验用酒黄连（批号：9138902）、制马钱子（批号：121201）药材购自四川欣康中药饮片有限公司，由笔者刘新教授鉴定均为正品。士的宁（批号：110705200306）、盐酸小檗碱（批号：110713200609）对照品均购自中国食品药品检定研究院；聚乙烯醇（PVA1788，分析纯，批号：2013101701，成都市科龙化工试剂厂）；水为超纯水；甲醇、乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
　　1。3实验
　　动物清洁级健康SD大鼠，雄性，体质量（25020）g，由重庆医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（渝）20140001。
　　2方法与结果
　　2。1色谱条件
　　色谱柱：ODS3C18柱（250mm4。6mm，5流动相：甲醇乙腈（0。1molL磷酸二氢钠0。025molL十二烷基硫酸钠溶液）502525；检测波长：254nm；柱温：30；流速：1。0mLmin；理论板数以士的宁峰计应不低于5000。
　　2。2黄马缓释喷雾膜剂的制备
　　取处方量PVA1788加适量水溶胀，溶解，加入处方量甘油、酒黄连与制马钱子的70乙醇渗漉提取液、乙醇适量，搅拌均匀，最后以水补足量，即得。另同法制备不含药液的空白膜溶液作为对照。
　　2。3检测溶液制备
　　精密称取士的宁和盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含士的宁0。012mg、盐酸小檗碱0。015mg的混合对照品溶液；取扩散池透析液1mL，稀释1倍后用0。45m微孔滤膜滤过，取续滤液，作为释放度试验供试品溶液；同法制备空白供试品溶液。
　　2。4方法学考察
　　2。4。1专属性试验：照上述色谱条件，分别取2。3项下各检测溶液注入高效液相色谱仪。结果表明辅料及溶剂对测定无干扰。
　　2。4。2线性关系考察：分别精密称取对照品士的宁6。2mg、盐酸小檗碱8。6mg，置50mL量瓶中，分别用甲醇稀释成士的宁、盐酸小檗碱浓度为124和172gmL的母液。再分别精密量取士的宁和盐酸小檗碱母液，加甲醇稀释成浓度分别为6。2、12。4、24。8、37。2、49。6、74。4gmL的士的宁对照品溶液和浓度分别为8。6、17。2、34。4、51。6、68。8、103。2gmL的盐酸小檗碱对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10L，注入液相色谱仪，测定士的宁及盐酸小檗碱的峰面积。得到士的宁的回归方程为：Y116。348X15。4444（r10。9999），表明士的宁在6。274。4gmL的浓度范围内呈良好的线性关系；盐酸小檗碱的回归方程为Y224。665X29。2345（r20。9998），表明盐酸小檗碱在8。6103。2gmL的浓度范围内呈良好的线性关系。2。4。3精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样6次，结果士的宁和盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为0。3、0。7，表明仪器精密度良好。
　　2。4。4稳定性试验：取按2。3项下方法制备的同一供试品溶液，分别于0、1、2、4、8和12h进样检测，记录峰面积。结果士的宁和盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为0。2、0。8，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
　　2。4。5加样回收率试验：精密量取已优化好基质处方的喷雾膜剂样品6份，每份精密加入高、中、低三种不同浓度的士的宁、盐酸小檗碱对照品溶液，各平行试验2次，按2。3项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算平均加样回收率。测得士的宁的平均加样回收率为97。8，RSD为1。1；盐酸小檗碱的平均加样回收率为99。3，RSD为1。2。2。5体外释放度的测定
　　采用改良Franz扩散池进行测定。试验前先将半透膜用NaHCO3和EDTA活化，待用。试验时，扩散池加满接收液（含30乙醇的生理盐水），将半透膜夹在2室中间，给药，排除气泡，恒温水浴加热，温度（350。2），磁力搅拌（300rmin），于各时间点取出部分接收液并补充相应体积的空白接收液。按2。3项下方法制备供试品溶液并依法测定，计算累积释放率。
　　2。6正交试验设计
　　2。6。1因素水平表：以制剂的成膜性能（喷雾效果、成膜时间、膜的性能）、士的宁和盐酸小檗碱在8h内的累积释放率为评价指标，经各项因素预试验显示，PVA1788、乙醇和甘油用量在一定范围内其可喷雾性、快干性、成膜性、膜柔韧性、保湿性等符合临床要求，故选择PVA1788、乙醇和甘油用量作为考察因素，采用L9（34）正交试验设计进行试验，因素水平见表1。因方中仅含两味主药，指标成分含量可用一种色谱方法测定，结合处方比例，将盐酸小檗碱和士的宁的累计释放率含量的权重系数定为。
　　2。6。2成膜性能评分：喷雾效果，满分30分，以喷出均匀雾状液体为佳，评分在3025分之间，雾滴状液体次之，评分在2515分之间，线状最次，评分在15分以下；成膜时间，在25，75的相对湿度下，喷约0。2mL本品于（33）cm2竖直去毛大鼠皮肤表面，以溶液不再流动的时间为成膜时间，总分40分，以成膜时间最短者记满分，其余每增加1min减5分；膜的性能，满分30分，考察药膜的黏附性、柔韧性，权重设为11，柔韧性以成膜后的最大拉伸长度计分。成膜性能评分结果。
　　2。6。3试验结果：正交试验结果见。分析可知，成膜性能和综合释放率的影响因素顺序均为甘油PVA1788乙醇，成膜性能最好的组合为C3A2B3；而综合释放率最高的组合为C2A2B2。可知：A、B、C三个因素均对成膜性能有显著的影响，各因素影响大小顺序为CB，最优制剂组成是C3A2B3；因素C、A对释放率有显著的影响，各因素影响大小顺序为CB，B无显著影响，最优制剂组成是C2A2B2，考虑到有效成分的释放率及制剂对皮肤的刺激性，乙醇用量对释放率影响不大，但对皮肤的刺激性影响大，故选择C3A2B2，即PVA17885，乙醇用量15，甘油6。2。6。4最优处方的验证：依据优选的最佳处方制备3批制剂，同法进行体外释放试验。结果膜剂成膜性能平均评分为84。3，士的宁8h内累积释放率平均值为71。8，盐酸小檗碱8h内累积释放率为72。3，综合累积释放度为72。1。实验表明所选工艺条件合理可行，工艺稳定且重现性较好。分别以零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi方程对膜剂体外释药数据进行拟合，结果见表5。由表5可知，一级动力学方程的相关系数较好，故确定膜剂体外释放曲线的最佳拟合方程为Ln（100Q）0。3134t4。446，r0。99。以时间t为横坐标，释放率R为纵坐标作释放曲线，见图1。由图1可知，药物在初始阶段快速释放，约3h即释放50，而在后阶段释放速率减慢，约5h达60，8h达72。
　　2。7体外透皮试验
　　2。7。1离体皮肤的制备：取健康大鼠，用8Na2S溶液脱毛，取无毛腹部皮肤，处理，冷藏备用。
　　2。7。2供试品溶液的制备：将鼠皮固定在Franz扩散池装置上，角质层朝上，以含30乙醇的生理盐水为接受液。取膜剂0。5mL注入扩散室，恒温水浴加热（350。2），平衡30min后搅拌（300rmin），分别在1、2、4、6、8、12、24h取接收液1mL，同时补加等体积的接收液。按2。3项下方法测定士的宁及盐酸小檗碱的含量，计算累积渗透率Q，结果见表6。以Q对t进行线性回归，得士的宁回归方程：Ln（100Q）0。06t4。446（r0。99），盐酸小檗碱回归方程：Ln（100Q）0。05t4。443（r0。99），均符合一级动力学方程。实验显示药物的透皮过程是药物经皮吸收的主要限速因素。
　　3讨论
　　3。1成膜基质的选择通过查阅文献以及对常用水溶性成膜材料PVA、PVP、CMCNa、卡波姆等的考察，PVA1788在成膜性、膜的柔韧性等方面均较好，性质稳定，药物在其中能均匀分散。在样品制备过程中要控制好乙醇的加入工艺，甘油对膜的形成、膜的柔软性和保湿性影响较大，但用量过大时则影响膜的成形。
　　3。2处方评价及优化综合考虑，将膜剂体外释放考察时间设定为8h。评价喷膜剂质量的指标较多，包括喷雾效果、成膜性、膜的柔韧性、均匀性、黏附性和释放度等，本研究采用成膜性能和释放度结合考虑，通过正交设计试验，实现了喷膜剂多个评价指标的同步优化。其中甘油为保湿剂，PVA1788为成膜材料，因制剂本身含醇量20，故不再加抑菌剂。透皮试验中曾加入氮酮、PEG400、1，2丙二醇等促透剂，单因素试验结果显示这些促透剂对透皮吸收有促进作用，但与不加促透剂时相比，透皮促进作用不显著，故不再加入。士的宁及盐酸小檗碱的释放和透皮均符合一级动力学方程，并反映了体外释放速率与经皮渗透速率间的关系。
　　3。3制剂的性能特点黄马酊含醇量较高，对破损皮肤刺激性大且无长效缓释作用；改进后的膜剂含醇量降低，皮肤刺激性实验、过敏性、毒性等安全性实验显示，本制剂符合安全用药规定，可以用于完整皮肤和破损皮肤。剂型改进后，药液喷涂后迅速成膜，不仅可以有效保护创面，并能缓释给药，降低给药次数，提高了制剂的顺应性和安全性。相关的药效学实验已在进行中。