L鸟氨酸盐酸盐细菌内毒素检查方法的建立

　　鸟氨酸(C5H12N2O2)是一种碱性氨基酸。在生物体内，鸟氨酸主要参与鸟氨酸循环(ornithine cycle)，又称尿素循环(urea cycle)，将有毒的氨转化为无毒的尿素并排出体外，对于体内氨态氮的排出有重要作用。其 L-鸟氨酸盐酸盐常用于生产复方氨基酸注射液，临床用于预防和治疗肝性脑病、肝病或肝性脑病急性期的静脉营养、其他原因引起营养不良的肠道外营养治疗。对于静脉注射的药品，热原(细菌内毒素)检查是控制药品质量的关键项目。目前，国内外药典均未收载 L-鸟氨酸盐酸盐的细菌内毒素检查方法，也未见该品种细菌内毒素检查方法的报道。为更好地控制其质量，保证临床用药安全，笔者通过实验，探讨采用鲎试剂检查 L-鸟氨酸盐酸盐中细菌内毒素的可行性，现报道如下。
　　1 实验药品
　　1.1 供试品 L-鸟氨酸盐酸盐(无锡某氨基酸有限公司，批号：0130601、0130602、0130603，规格：原料药，包装：每袋 5 g)。
　　1.2 鲎试剂(TAL) TAL1：湛江安度斯生物有限公司，批号：1209271，规格：0.5 ml，标示灵敏度=0.25 EU/ml;TAL2：湛江博康海洋生物有限公司，批号：1305251，规格：0.5 ml，标示灵敏度 =0.25EU/ml;TAL3：湛江安度斯生物有限公司，批号：1305132，规格：0.1 ml，标示灵敏度 =0.06 EU/ml;TAL4：湛江博康海洋生物有限公司，批号：1304190，规格：0.1 ml，标示灵敏度=0.06 EU/ml。
　　1.3 细菌内毒素工作标准品 中国食品药品检定研究院，批号：150601-201174，每支含细菌内毒素160 EU。
　　1.4 细菌内毒素检查用水(BET 水) 湛江安度斯生物有限公司，批号：1103110，规格：50 ml，内毒素含量0.003 EU/ml。
　　2 方法与结果
　　按《中国药典》2010 年版二部附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法项下凝胶法，以及《中国药品检验标准操作规范》2010 年版进行试验。
　　2.1 供试品细菌内毒素限值(L)的确定 L-鸟氨酸盐酸盐主要用于生产复方氨基酸注射液，目前尚无单方注射用制剂，因此，不能采用《中国药典》2010 年版二部附录Ⅺ E 规定的方法确定其细菌内毒素限值。目前国外药典亦无该产品的细菌内毒素检查方法。
　　经查阅《中国药典》2010 年版二部，用于生产复方氨基酸注射液的各种氨基酸原料药的细菌内毒素限值大致在 6 EU/g(组氨酸)至 50 EU/g(色氨酸)。为保证临床用药安全，并结合生产厂家的产品质量控制能力，将本品的细菌内毒素限值(L)定为 5 EU/g。
　　2.2 鲎试剂灵敏度复核 按细菌内毒素检查法项下方法进行，结果 TAL1的灵敏度测定值 C为 0.125EU/ml，TAL2的 C为 0.25 EU/ml，TAL3和 TAL4的 C均为 0.06 EU/ml。4 批鲎试剂的 C均在 0.5  2 范围内，均符合规定，可用于试验。
　　2.3 供试品干扰试验
　　2.3.1 预实验 目前市售鲎试剂灵敏度 在 0.5 0.03 EU/ml。由公式 c=/L 计算，供试品溶液的浓度范围应为 100 6 mg/ml。
　　2.3.2 干扰试验 1 取 3 批供试品，用 BET 水分别制成25 mg/ml 的供试品溶液，再用 BET 水及供试品溶液将同一支细菌内毒素工作标准品制成 0.5 EU/ml、0.25EU/ml、0.125 EU/ml、0.06 EU/ml 的系列浓度。分别用TAL1 和 TAL2 进行实验，每一内毒素浓度重复4 管，同时设阴性对照(NC)。
　　3 结论
　　根据上述实验结果，L-鸟氨酸盐酸盐可采用细菌内毒素检查法(凝胶限度试验)，采用灵敏度 0.06EU/ml 以上的鲎试剂进行检测，最大不干扰浓度为12.5 mg/ml，细菌内毒素限值为 5 EU/g，即 L-鸟氨酸盐酸盐采用细菌内毒素检查法(鲎试剂法)是可行的。