桔梗多糖的提取及其抑菌活性研究

　　桔梗(Rehmannia glutinosa)为玄参科植物，是传统的药食同源物品，最早出典于《神农本草经》。桔梗富含多糖、桔梗苷、二氢梓醇苷、桃叶珊瑚苷及多种维生素及氨基酸。多糖类化合物是桔梗中的一类重要活性成分，具有抑菌、降低血糖、止血、抑制肿瘤生长，抗炎、抗肝损害、调节机体免疫等功能。试验对桔梗多糖的响应面提取工艺进行优化，并对其抑菌活性进行研究，以期为桔梗的综合利用提供理论基础。
　　1 试验材料与方法
　　1.1 原料与试剂
　　桔梗：市售，洗净后在40  干燥;葡萄糖、磷酸盐缓冲液、苯酚、浓硫酸、无水乙醇、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、黑曲菌和啤酒酵母，实验室提供。
　　1.2 试验仪器与设备
　　JP300G 超声波提取设备;GZX-9070 电热恒温鼓风干燥箱;AL104 电子分析天平;RE-52A 旋转蒸发仪;LE400 恒温水浴锅;THZ-C 恒温振荡器;YXQ.SG41.280 手提式压力蒸气灭菌器等。
　　1.3 试验方法
　　1.3.1 工艺流程
　　桔梗粉碎提取过滤离心浓缩醇沉浓缩干燥粗多糖含量测定抑菌性质研究
　　1.3.2 标准曲线的绘制
　　准确称葡萄糖0.100 2 g 定容至100 mL，再稀释成10，20，40，60，80和100 mg/L的系列标准溶液。溶解蒽酮0.2 g于100 mL 95%硫酸中，置棕色瓶中冷暗处保存。分别取0.2 g/L标准葡萄糖液0，0.1，0.2，0.3，0.4和0.5 mL用蒸馏水补足1 mL，分别加入4 mL2 g/L温暗处放10 min，于600 nm处用比色皿比色，以对照样品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。得到标准曲线的回归方程为：y=0.027x-0.083，R2=0.999 8， x指标准品的质量浓度(mg/L)， y指吸光度。
　　1.3.3 桔梗多糖提取量的测定
　　试验采用苯酚-硫酸法测定桔梗多糖含量。称量桔梗粉末(过60目筛)，按一定液料比值加入蒸馏水，在一定温度微波提取一定时间，提取液4 000 r/min离心10 min后取上清液，上清液用旋转蒸发仪浓缩到10 mL，然后加入3倍体积80%的乙醇溶液浸提12 h，弃去上清液，沉淀加水溶解并定容至250mL。吸取0.5 mL测定多糖的含量，即为多糖提取率。
　　2 结果与分析
　　2.1 桔梗多糖提取条件的优化试验
　　2.1.1 液料比值对桔梗多糖提取效果的影响
　　设定超声波功率为300 W，超声波时间为45 min，乙醇体积分数为85%，分别在液料比值为5，10，15，20，25和30(mL/g)6个梯度下提取多糖。由图1可以看出，液料比值应控制在20(mL/g)左右较为适宜。
　　2.1.2 乙醇体积分数对多糖提取效果的影响
　　设定超声波功率为300 W，超声波时间为45min，液料比值为20(mL/g)，分别在乙醇体积分数为70%，75%，80%，85%，90%和95% 6个梯度下提取桔梗多糖。由图2可以看出，乙醇体积分数在85%左右较为适宜。
　　2.1.3 超声功率对桔梗多糖提取效果的影响
　　设定乙醇体积分数为85%，超声波时间为45 min，液料比值为20(mL/g)，分别在超声波功率为200，250，300，350，400和450 W 6个梯度提取桔梗多糖。
　　2.1.4 提取时间对桔梗多糖提取效果的影响
　　设定乙醇体积分数为85%，超声波功率为300W，液料比值为20(mL/g)，分别在超声波时间为30，35，40，45，50和55 min 6个梯度下提取桔梗多糖。
　　3 结论
　　超声辅助提取桔梗多糖的最佳提取工艺条件为超声功率250 W，提取时间为45 min，乙醇体积分数为85%，液料比值为15(mL/g)。此试验条件下桔梗多糖提取率为8.01 mg/g。同时对桔梗多糖抑菌谱的测定活性进行研究，结果表明其具有较宽的抗菌谱。桔梗多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为6.25%，对沙门氏菌的MIC为12.5%，对枯草芽孢杆菌、黑曲菌和啤酒酵母的MIC为25%。