关于补骨脂平喘作用分析的论文

　　1材料与仪器
　　1。1动物
　　SD大鼠，70只，SPF级，雌雄各半，180g左右，合格证号：0012625，由广州中医药大学实验动物中心提供。
　　1。2试剂
　　卵白蛋白批号：970612上海化学试剂公司；氢氧化铝干粉批号：200203012广州化学试剂厂；灭活百日咳杆菌（100亿个ml）广东省中医院提供；大鼠IL4（批号20060620）、IFN（批号20060620）ELISA试剂盒由晶美生物工程有限公司提供；IL5（批号20983008）ELISA试剂盒由BanderMedsystems提供。
　　1。3补骨脂不同溶剂提取物补骨脂95乙醇提取物浸膏，浓度：3。45g药材ml（简称浸膏）；补骨脂95乙醇提取石油醚萃取物，浓度：10。0g药材ml（简称石油醚萃取物）；补骨脂95乙醇提取醋酸乙酯萃取物，浓度：6。67g药材ml（简称醋酸乙酯萃取物）；补骨脂95乙醇提取水萃取物，浓度：10。0g药材ml（水萃取物）；补骨脂水提取物，浓度：10。0g药材ml（简称水提取物）；补骨脂95乙醇提甲醇洗脱物，浓度：2g药材ml（简称甲醇洗脱物），以上试剂均由广州中医药大学中药学院提供。
　　1。4仪器酶标仪BIORADSModel550，日本；CSW型超声雾化器汕头光电研究所；10L玻璃干燥器。
　　2方法
　　2。1分组
　　将动物随机分成7组，10只组：哮喘模型组（给水，1。0ml100g）、浸膏组（药材0。9g100g）、石油醚萃取物组（药材2。5g100g）、醋酸乙酯萃取物组（药材1。7g100g）、水萃取物组（药材2。5g100g）、水提取物组（药材10。0g100g）、甲醇洗脱物组（药材2。5g100g）。以上各组动物连续灌胃给药治疗10次，1次d。末次治疗后2h，各组动物心脏采血5ml，1000rmin离心15min，血清分装（1ml管）保存于70低温冰箱内待测：IL4，IFN，IL5（严格按照ELISA试剂盒说明书分别检测）。
　　2。2卵蛋白哮喘大鼠模型的建立
　　2。2。1大鼠致敏
　　上述分组中每只动物腹腔注射抗原液0。5ml100g（含卵蛋白100mg、氢氧化铝干粉100mg和2。5109个百日咳杆菌ml，制成悬浊液）7致敏第1次，次日每只大鼠再次腹腔注射0。5ml只致敏液加强。
　　2。2。2激发和治疗
　　首次致敏后第15天，于每天上午89时大鼠置于10L玻璃干燥器内超声雾化吸入2卵蛋白20min激发哮喘，连续14d。激发后第4天起，于每天激发后大鼠口服给相应试剂治疗（见2。1实验分组）。正常组以生理盐水取代抗原液按0。5ml100g腹腔注射致敏大鼠，第2天以0。5ml只腹腔注射生理盐水加强；首次致敏后第15天，每天上午89时该组大鼠超声雾化吸入生理盐水20min激发哮喘，连续14d。激发后第4天起，于每天激发后大鼠口服给蒸馏水治疗。
　　2。3统计分析结果
　　采用四川大学黄志勇主编的（PEMS3。0）《中国医学百科全书医学统计学》统计软件包进行统计：两组均数比较t检验（方差齐）或t（方差不齐）。
　　3结果
　　3。1补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠IL5含量的影响结果见表1。由表1可见，大鼠服用补骨脂不同溶剂提取物后，血清IL5含量呈下降趋势，其中补骨脂浸膏、水萃取物、水提取和甲醇洗脱物各成分组大鼠血清IL5含量降低明显，与哮喘模型组比较Plt；0。05或Plt；0。01，差异有显著意义。而石油醚和醋酸乙酯萃取物两成分组大鼠血清il5含量降低不明显，与哮喘模型组比较pgt；0。05，无显著性差异。
　　3。2补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠IL4含量的影响结果见表1。由表1可见，大鼠服用补骨脂不同溶剂提取物后，血清IL4含量呈升高趋势，其中补骨脂浸膏、石油醚萃取物和水提取物各成分组大鼠血清IL4含量升高明显，与哮喘模型组比较Plt；0。05或Plt；0。01，差异有显著意义。而醋酸乙酯萃取物、水萃取物和甲醇洗脱物三成分组大鼠血清il4含量升高不明显，与哮喘模型组比较pgt；0。05，无显著性差异。
　　3。3补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠IFN含量的影响结果见表1。由表1可见，大鼠服用补骨脂不同溶剂提取物后，不同溶剂成分大鼠血清IFN含量升降不一致，其中补骨脂浸膏和石油醚萃取物两成分组大鼠血清IFN含量升高明显，与哮喘模型组比较Plt；0。05，差异有显著意义。醋酸乙酯萃取物、水萃取物和甲醇洗脱物三成分组大鼠血清IFN含量减低显著，与哮喘模型组比较Plt；0。05或Plt；0。01，有显著性差异，而补骨脂水提对ifn含量未见明显影响，与哮喘模型组比较pgt；0。05，无显著性差异。表1不同提取物对哮喘大鼠IL5，IL4，IFN含量的影响（略）
　　3。4补骨脂不同溶剂提取物对哮喘大鼠Th1Th2（IFNIL5）的影响哮喘模型组、醇提浸膏组、石油醚萃取组、甲醇洗脱物组和水提取物组的Th1Th2比值依次为（n10）：0。50。2，1。10。5，0。90。5，0。80。4和1。20。5。提示，大鼠服用补骨脂醇提上述4种溶剂萃取物后，血清Th1Th2比值呈增加明显，与哮喘模型组比较Plt；0。05，差异有显著意义。而醋酸乙酯萃取物（0。40。2，n10）和水萃取物（0。60。2，n10）两成分组大鼠血清Th1Th2降低或增加不明显，与哮喘模型组比较P0。05，无显著性差异。
　　4讨论
　　哮喘与Th1细胞分泌的IFN等细胞因子及Th2细胞产生的IL4，IL5等细胞因子含量和Th1Th2比值密切相关。Th2的主要代表产物IL4，能促进B细胞产生IgE，引发炎症介质释放的链式反应，促进炎症细胞的趋化聚集，引起呼吸道血管通透性增加和粘膜水肿，平滑肌痉挛及粘液分泌亢进，是引起哮喘的重要因素。Th1的主要代表产物是IFN，能抑制IL4，IL5等细胞因子的产生，进而抑制IgE的产生和Eos活性，抑制IAR和LAR，是哮喘免疫调节中的一个重要的抑制因子，许多细胞因子通过它发挥生物效应8。因此，采用IFN，IL5，IL4作为哮喘敏感指标进行药物筛选具有合理性。补骨脂是临床上常用的补肾助阳中药，具平喘之功，临床上常用于虚寒喘咳9。补骨脂是今后应加强研究和开发的抗气道抗炎症中药之一2。我院从20世纪80年代初使用补骨脂注射液治疗支气管哮喘取得了理想的疗效，但其作用的。物质基础并不清楚。因此，我们在前期研究的基础上2，3，采用卵蛋白哮喘大鼠为模型，以体内血清IFNIL4IL5含量变化为指标，初步筛选补骨脂平喘作用的有效部位。
　　从IFN含量变化来看，补骨脂95乙醇提取物浸膏和补骨脂95乙醇提取石油醚萃取物作用明显，可能是补骨脂平喘的主要成分，但从抑制IL5和IL4含量分析，补骨脂95乙醇提取水萃取物和补骨脂95乙醇提甲醇洗脱物对Th2细胞产生的IL4，IL5细胞因子有较强的抑制作用，其他成分却升高或对IL5，IL4没有显著影响，而补骨脂水提取物对IFN含量提高作用不明显。另外，补骨脂95醇提水萃取物显著降低IL5和IFN含量，同时在给药的过程中我们发现水萃取物的毒性明显强于其他成分，这与其肾毒性是否相关值得关注。根据以上分析，我们初步推测补骨脂平喘有效部位应该主要是醇提成分：补骨脂95乙醇提取物浸膏，补骨脂95乙醇提取石油醚萃取物和甲醇洗脱物。
　　从哮喘中考察Th1Th2的比值变化更具有意义10，因此我们以IFNIL5为例，分析Th1Th2的变化，探讨补骨脂3个醇提成分（浸膏、石油醚萃取物和甲醇洗脱物）哪个为平喘的最佳有效部位。哮喘模型组、醇提浸膏组、石油醚萃取物组和甲醇洗脱物组的Th1Th2依次为（n10）：0。50。2，1。10。5，0。90。5和0。80。4，与哮喘组比较三者的Plt；0。05，差异有显著意义，但醇提浸膏的比值更大。因此结合前面的分析，我们认为三者的平喘作用大小依次为：补骨脂95乙醇提取物浸膏gt；补骨脂95乙醇提甲醇洗脱物补骨脂95乙醇提取石油醚萃取物。
　　【参考文献】
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