连翘酯苷论文分析

　　1 、材料
　　1。1 仪器与试剂
　　美国BECKMAN高效液相色谱仪，125型泵，168型PDA检测器，32Karat色谱工作站；HAMILTON微量进样器（HAMILTON公司）；微孔滤膜φ 13 mm，0。45 μm（天津市色谱科学技术公司）；YCQ—300型超声波清洗器（上海凯波超声设备有限公司）。甲醇为色谱纯，水为双蒸水并经0。45 μm水系滤膜过滤。
　　1。2 样品
　　连翘酯苷、连翘苷对照品均为自行分离精制，并经UV、IR、NMR鉴定结构，HPLC检测，面积归一化法计算纯度，均大于99%。选西安医学院种植的连翘和金钟花为样株 Vahl和F。viridissima Lindl。，果实具体采收时间见表1。50  干燥至恒重后，研成粉末，过2O目筛，备用。
　　2 、方法与结果
　　2。1 色谱条件与系统适用性试验
　　色谱柱：Diamonsil—C18（5 μm，4。6 mm 250 mm）。流动相：A—水，B—甲醇；B相洗脱梯度：0 14 min，34。6%；14 15 min， 34。6% 43。5%；15 23 min，43。5%；23 24 min，43。5% 45%；24 34 min，45%；34 36 min，45% 80%；36 40 min，80%；流速：1 mL/min。柱温：室温28  ；灵敏度0。02 AUFS；检测波长270 nm。理论塔板数以连翘酯苷计应不低于3 300，以连翘苷计应不低于7 600。色谱图见图1。
　　2。2 对照品溶液的制备
　　分别精密称取连翘酯苷和连翘苷对照品9。86、4。40 mg置于10 mL量瓶中，用60%甲醇定容至刻度，置于冰箱中（4  ）保存备用。
　　2。3 供试品溶液的制备
　　精密称取不同采收期连翘、金钟花果实的干燥粉末各约1。000 g置于具塞三角瓶中，精确加入甲醇30 mL，精密称质量，超声提取30 min后，用甲醇补足质量，加20 mL双蒸水，混匀，用微孔滤膜（4。5 μm）过滤，作为供试品溶液。
　　2。4 标准曲线及线性范围的考察
　　精密吸取上述混合对照品溶液3、5、10、20、40、50 μL，进样测定，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法以进样量X（μg）对峰面积Y进行回归，得连翘酯苷和连翘苷的回归方程，分别为：Y 582 121X－816 019，r 0。999 7；Y 580 793X－33 182，r 0。999 8。结果表明，连翘酯苷进样量在2。96 49。30 μg、连翘苷进样量在1。32 22。00 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
　　2。5 检测限和定量限测定
　　连翘酯苷的检测限（S/N 3）为18。72 ng/mg，定量限（S/N 10）为62。41 ng/mL；连翘苷的检测限（S/N 3）为13。74 ng/mL，定量限（S/N 10）为45。79 ng/mL。
　　2。6 精密度试验
　　精密吸取混合对照品溶液20 μL，连续进样6次，测定峰面积，结果连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1。20%、1。04%…取同一连翘果实（LQ—1）样品6份，制备供试品溶液，各取20 μL进样，测定峰面积，计算，连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为2。00%、0。68%。精密吸取混合对照品溶液20 μL分别于配制后的0、4、8、16、24、48 h内进样，测定峰面积。计算连翘酯苷、连翘苷的`RSD分别为1。61%、1。96%。结果表明，对照品溶液在48 h内稳定。
　　2。7 样品中连翘酯苷、连翘苷的含量测定
　　取连翘各部位的干燥粉末，按供试品溶液制备方法操作，按照色谱条件测定峰面积，以外标法计算含量，采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考察，分别提取并观察230、254、270、280、324、365 nm波长处的色谱图[4]。结果发现230、254、280 nm处其他物质的吸收较强，干扰较大，324、365 nm波长处干扰较小，但连翘苷无吸收，而270 nm处4个待检测物质的吸收峰峰形较好且其他物质的吸收较弱，干扰较少，结果较为准确。故本试验中选择了270 nm作为检测波长。