细胞与克隆技术论文

　　克隆技术是众多具有极大影响力的技术之一。下面是小编精心推荐的细胞与克隆技术论文，希望你能有所感触！家兔克隆骨髓基质细胞的体外培养
　　【摘要】目的：探讨家兔骨髓基质细胞在体外传代的培养。方法取家兔股骨骨髓，分离骨髓基质细胞，于1640培养体系中培养，之后固定计数。结果在26106个cm2范围内，其接种细胞数与所形成的克隆集落（CFUF）数呈良好线性关系。随着培养时间的延长，克隆集落也增多，变大。3周龄家兔的造血基质祖细胞较6周龄者为多。结论基质祖细胞CFUF呈非均质性的，可能存在不同亚群。
　　【关键词】家兔；骨髓；造血基质祖细胞；克隆
　　骨髓基质细胞是支持和调节造血细胞定居、增殖、分化、发育和成熟的内环境主要细胞成分〔1〕。曾对小鼠体外单层培养造血基质细胞的培养研究，发现其接种的细胞数与成集落数呈良好的线性关系〔2〕。目前对家兔的骨髓器官基质细胞的研究国内研究有过报道〔3〕。本文用体外培养骨髓基质细胞技术〔4〕对家兔的骨髓基质细胞体外培养特点进行了探讨。
　　1资料与方法
　　1。1材料来源实验动物系北京科宇动物养殖中心饲养的雌雄两性、36周龄之纯种家兔。
　　1。2主要试剂与器材RPME1640培养液，小牛血清（中国药品生物制品检定所），平底中性玻璃培养瓶，二氧化碳孵箱，微孔滤网。
　　1。3骨髓单个核细胞制备6周龄家兔用乙醚麻醉处死；3周龄者则用颈椎脱臼致死。在无菌条件下取双侧股骨修洁后剪掉骺端，用带16号针头注射器以1640培养液冲出骨髓细胞，再用滤网过滤制取单个核细胞悬液，计数后用所需细胞量进行体外CFUF培养。
　　1。4CFUF培养和测定将6周龄家兔的骨髓细胞以2106个cm2，3周龄的以26106个cm2置于含20小牛血清的1640培养液的培养体系的培养瓶中，于37，5CO2，饱和湿度的CO2培养箱内培养。分别于第4天，第6天用含20小牛血清的1640培养液换液，培养到第八天冲洗后用甲醛固定半小时，蒸馏水冲洗后用姬姆萨染色12min后晾干，待计数用。
　　2结果
　　2。1CFUF克隆集落形成过程观察于培养第4天在倒置显微镜下观察培养细胞，发现淡红色背景下（红细胞）有圆形发亮的较大基质细胞生长，拉长的细胞较少见，振荡后观察未见发亮细胞浮起，说明细胞已贴壁。培养第六天镜下观察，发现基质细胞明显增多，拉长者较多，形成了克隆集落，6周龄的骨髓基质细胞生长速度明显低于3周龄者，且培养同天数的6周龄的克隆集落数明显低于3周龄的。克隆集落数。
　　2。2CFUF计数计数由50个以上细胞所形成的集落数，结果如图1、2和表1。由5099个细胞组成的集落为小集落，由100199个细胞组成的集落为中集落，gt；200个细胞者的为大集落。
　　3讨论
　　从以上述结果可以发现：培养时间越长，形成克隆集落相对越多，3周龄者，骨髓细胞较多，造血基质祖细胞也较多，形成的克隆集落数也多。在26106个cm2范围内，形成的克隆集落数与种植细胞数呈良好的线性关系。
　　通过对集落大小，所含细胞数与密度比较，表明CFUF非均质性的，可能存在不同亚群。这对体外培养骨髓细胞的增殖与分化有一定的指导意义。
　　参考文献
　　〔1〕姚程，彭丽萍，姜振宇，等。骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究。白求恩医科大学学报，2001，17（4）：386388。
　　〔2〕于洪臣，郭占之，毕晓颖，等。白求恩医科大学学报，1991，17（3）：219。
　　〔3〕王春艳，何欣，李增新，等。兔骨髓基质细胞的分离培养研究。北华大学学报，2005，6（6）：520522。
　　〔4〕蔡国锋，黄开，章庆国。兔骨髓基质干细胞体外培养的实验研究。东南大学学报，2006，25（1）：1619。