浅谈胆固醇对磷酸川芎嗪微乳透皮性质的影响

　　微乳（microemulsion，ME）作为经皮释药载体优于一般的乳剂。理论上认为微乳的层状结构决定其主要释放方式为药物由内相经表面活性剂/助表面活性剂层进入外相，再由外相释放至角质层。药物在外相中浓度升高，利于药物的释放，而药物脂溶性增加与角质层分配系数增加有直接的关系。前期针对磷酸川芎嗪（ligustrazine phosphate，LP）水溶性强、半衰期短的性质制备了W/O型经皮给药微乳，体外研究显示皮肤透过性提高，同时单次给药可实现持续释放。作为亲水性药物，磷酸川芎嗪经皮吸收的限速步骤为其穿透角质层的过程。而角质层水化程度的提高有利于亲水药物的透皮吸收。由于胆固醇作为经皮给药制剂的添加剂能够增加角质层的水化程度，因此本研究考察在磷酸川芎嗪微乳中加入胆固醇后对药物透皮特性的影响。
　　1 材料与方法
　　1.1 一般材料
　　1.1.1 动物：Wistar大鼠，雄性，体质量（20020）g，购自军事医学科学院实验动物中心，动物许可证号：SCXK-（军）2008-005。
　　1.1.2 仪器与试剂：TK-6A型透皮扩散仪（上海得莘实业有限公司）；XP205 型万分之一电子天平（METILERTOLEDO，瑞士）；岛津20A 高效液相色谱仪（SHIMADZU，日本）；SYZ-550型石英亚沸高纯水蒸馏品（江苏金坛正基仪器有限公司）；磷酸二氢钾，磷酸氢二钾（天津化学试剂三厂，分析纯））；甲醇（Merckcompany，色谱纯）；磷酸川芎嗪原料药（北京双鹤制药股份有限公司，20070325， 99%）；磷酸川芎嗪标准品（中国药品生物制品检定所，100845-200501）；双蒸水（自制）；肉豆蔻酸异丙酯（天津康科德试剂公司，分析纯）；Labrasol 和plurololeique（Gattefosse company，法国）；胆固醇（天津康科德化学试剂有限公司，分析纯）。
　　1.2 方 法
　　1.2.1 色谱方法
　　1.2.1.1 色谱条件：色谱柱：ShimpackC18 柱（250mm4.6 mm，5m，Shimadzu）；流动相：为甲醇：水（60:40），流速1 ml/min，检测波长285 nm。
　　1.2.1.2 磷酸川芎嗪储备液的配制：精密称取磷酸川芎嗪标准品10 mg，用蒸馏水定容至100 ml，摇匀，备用。
　　1.2.1.3 标准曲线的绘制：精密吸取储备液，按不同比 例 稀 释 ，得 到 浓 度 为 0.21，1.05，4.20，10.50，42.00g/ml不同浓度标准溶液，分别进样20l，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，记录色谱图，峰面积。
　　1.2.2 含不同浓度胆固醇微乳的制备：以肉豆蔻酸异 丙 酯 为 油 相 ，Labrasol 为 表 面 活 性 剂 ，plurololeique为助表面活性剂，按照表1的处方量将油相、表面活性剂、助表面活性剂、胆固醇和磷酸川芎嗪混合，磁力搅拌至澄清即得含胆固醇载药微乳。
　　2 结 果
　　2.1 HPLC方法
　　2.1.1 色谱图：图1为不同标准品、空白微乳接收液和载药微乳接收液的HPLC色谱图。由图可知实验液相条件下，磷酸川芎嗪峰能够完全与接收液中干扰物质分离。
　　2.1.2 标准曲线回归方程：标准曲线测定项下测得峰面积A，以A对浓度c进行直线回归，得标准曲线回归方程：A = 23502C+223.5，r = 0.9999，线性相关性良好。
　　3 讨 论
　　微乳中的含水量直接影响角质层水化程度，而含水量变化对水溶性药物在微乳中溶解度有显著影响。当水相含量升高时，水溶性药物在微乳中溶解度增加，即意味着药物的热力学稳定性增加，其从微乳向皮肤扩散的趋势减小，药物从微乳中的释放速度减小。
　　胆固醇为微乳处方中常用的甾体化合物，少量使用不会对水溶性药物在微乳中溶解度有显著影响。其在与角质层脂质作用时插入酰胺之间。由于其结构为刚性多平面甾体结构，具有较大的空间结构，增加了水分与脂质极性末端作用的机会，能够提高角质层的水化程度。因此微乳中加入胆固醇可调节角质层水化程度同时，但是对药物在微乳中热力学活性影响不大。本研究显示，胆固醇的加入减小了磷酸川芎嗪微乳透皮迟滞时间。迟滞时间为经皮给药过程中皮肤与给药载体之间达到热力学平衡以及药物在角质层中分配达到平衡的过程，胆固醇缩短这一过程的其原因可以解释为：胆固醇虽然能够增加角质层的水化程度，但是水分来自于微乳。在增加角质层水化程度的同时，也加速了微乳与角质层之间的水化平衡过程，因此药物透皮吸收速度更加趋于匀速。
　　而研究还发现，随着胆固醇浓度的升高，相同含水量的微乳对角质层水化作用增强。但是角质层水化程度过高反而会影响亲水性药物的透皮吸收。原因为角质层水化程度过高会造成亲水性药物在角质层中的滞留，抑制其向真皮层的扩散。因此 1.5%胆固醇微乳透皮速率较前两者反而降低。综上所述，在制备亲水性药物经皮给药微乳时，可以考虑添加胆固醇来增加水溶性药物透皮速率及减少迟滞时间，但同时需要考察胆固醇在微乳中浓度对药物透皮吸收的影响。