摘 要：目的 建立检测肉类食品安全的快速检测方法。方法 使用快速检测试纸检测肉类掺假，以及肉类中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺与沙丁胺醇。结果 使用猪肉检测快速检测试纸，检测羊肉中掺加的猪肉，掺加猪肉的比例为0.75% 25%，可以检出。使用胶体金检测仪结合快速检测试纸，检测肉类中添加的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺与沙丁胺醇，盐酸克伦特罗的平均添加回收率在110%左右，莱克多巴胺的平均添加回收率为90% 120%，沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。结论 快速检测试纸适合对肉类食品安全进行现场快速筛查。 关键词：快速检测试纸 肉类掺假 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 中图分类号：TS201.6 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2015）11（c）-0209-04 肉类是人们重要的食物来源，肉类食品安全是食品安全中的重点之一。目前，有些商贩在高价肉类中掺入低价肉类，以降低成本，这样很容易引发食品安全问题，甚至可能引发宗教问题与民族矛盾。另一方面，肉类中残留的β-兴奋剂类药物（包括克伦特罗，莱克多巴胺、沙丁胺醇等）则会危害人类健康。因此，建立一种快速准确的检测肉类食品安全的检测方法，用于检测肉类掺假，以及肉类中残留的β-兴奋剂类药物，具有重要意义。 检测肉类掺假的方法，有色谱法[1]、电泳法[2]、聚合酶链式扩增法（PCR）[3]、酶联免疫分析法（ELISA）[4]等。检测β-兴奋剂类药物的方法有高效液相色谱法[5，6]、酶联免疫分析法（ELISA）[7，8]、胶体金免疫层析法[9]等。其中，色谱法与电泳法的操作较繁琐，对操作人员的要求较高，PCR与ELISA的方法反应时间较长。该研究使用胶体金检测仪结合快速检测试纸的方法，不仅检测时间短，而且能够进行定量检测，适合对肉类食品安全进行现场快速检测或筛查。 1 材料与设备 1.1 试剂与材料 猪肉检测快速检测试纸，盐酸克伦特罗快速检测试纸，莱克多巴胺快速检测试纸，沙丁胺醇快速检测试纸，均来自北京普析通用仪器有限责任公司，其他化学试剂购于西陇化工股份有限公司。 1.2 设备 胶体金检测仪（型号：TR3）来自北京普析通用仪器有限责任公司。 2 方法 2.1 肉类掺假检测 前处理步骤：（1）将待测样品均质，称取（0.5 0.01）g均质后的样品；（2）加入3 mL的去离子水（水温为（50 5） ），剧烈振荡30 s；（3）静置待其自然沉淀，处理后的样品恢复至室温后，取上清液进行检测。 检测步骤：（1）将试纸条水平放置，在试纸条加样处加入100 μL待检测溶液；（2）静置10 min后观察检测结果；（3）结果判断：C线显示红色色带，T线不显示红色色带，判为阴性。C线显示红色色带，T线显示红色色带，无论深浅，判为阳性。C线不显示红色色带，无论T线是否显示红色色带，该试纸均判为无效。 在羊肉中掺加不同比例的猪肉，按照上述步骤进行前处理与检测，记录检测结果。 2.2 猪肉中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测 前处理步骤：（1）取4 g匀浆去脂肪肉样（肉泥/去脂肪）于50 mL离心管中，加0.5 mL稀释液，盖紧管盖；（2）将装有样品的离心管放入80 水中水浴5 min，冷却至室温，尽量取出管中液体移至于干净离心管中；（3）4000 r/min离心1 min，取去掉脂肪层的上清液进行检测。 检测步骤：（1）使用待测物质的标准品，配制一系列浓度的标准品溶液，取出检测卡，开封后平放于桌面，将标准品溶液加100 μL于样品孔中。加样后5 min，使用胶体金检测仪读数。将标准品溶液的浓度与T/C（T线深浅和C线深浅的比值），对应输入至胶体金检测仪建立标准曲线；（2）取出检测卡，开封后平放于桌面，将离心管中的上清液加100 μL于样品孔中。加样后5 min，使用胶体金检测仪读数，根据标准曲线计算出浓度值。 在猪肉中添加一定浓度的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇，按照上述步骤进行前处理与检测，每个样品重复检测5次，计算添加回收率与平均值。添加回收率的计算方法：添加回收率 = （样品检测浓度空白样品检测浓度）/ 添加浓度 100%。 3 结果 3.1 肉类掺假 羊肉中掺加猪肉的检测结果见图1，由图1可见，在羊肉中掺加0.75% 25%（质量分数）的猪肉，可以观察到T线。掺加猪肉的比例越高，T线颜色越深。说明该快速检测试纸条可以用于检测羊肉中掺加猪肉，而且较灵敏。 3.2 猪肉中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇 图2为盐酸克伦特罗的标准曲线，在图2中，标准品溶液的浓度分别为：0，0.61，1.25，2.5，5.0 ng/mL。 图3为莱克多巴胺的标准曲线，在图3中，标准品溶液的浓度分别为：0，1.0，1.5，2.5，5.0 ng/mL。 图4为沙丁胺醇的标准曲线，在图4中，标准品溶液的浓度分别为：0，0.2，0.6，1.8，3.0 ng/mL。 猪肉中盐酸克伦特罗，莱克多巴胺，沙丁胺醇的添加回收率见表1。由表1可见，盐酸克伦特罗的平均添加回收率在110%左右，莱克多巴胺的平均添加回收率为90% 120%，沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。 3.3 胶体金检测仪与目测结果比较 图5为猪肉中添加沙丁胺醇的检测结果，可见，猪肉中添加沙丁胺醇的浓度为3 μg/kg，目测结果为阳性。由表1可见，猪肉中添加沙丁胺醇的浓度为0.2 μg/kg，胶体金检测仪结果为阳性。所以，胶体金检测仪与目测相比，检测灵敏度更高。 4 讨论 该研究使用快速检测试纸检测羊肉中掺加的猪肉，掺加猪肉的质量分数低至0.75%时，可以被检出。该方法灵敏度较高，而且检测时间较短，只需要20 min就能够完成样品处理与检测的全过程，适合用于现场快速筛查。并且，该研究使用胶体金检测仪与快速检测试纸相结合的方法，检测猪肉中添加的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇，与传统的胶体金免疫层析法相比，灵敏度更高，适合用于现场快速筛查。 该研究为研究肉类掺假的基因检测试纸与基因芯片奠定了基础。基因检测试纸的检测原理为，首先提取待检样本的核酸，经过核酸扩增反应，核酸杂交技术，以及胶体金免疫层析检测技术，可以快速地实现对肉类基因的定性检测。因为核酸的热稳定性和酸碱稳定性与蛋白质相比更优，所以，以动物种属间遗传信息的差异作为物种鉴别的检测靶点，具有特异性高，方法便捷，不受组织类别限制等诸多优势，已经成为食品中肉类成分鉴别的重要方法。 基因芯片的技术原理为：核酸分子原位杂交技术，将特别设计的核酸片段作为分子探针，固定在芯片基底上，样品经过处理，核酸聚合酶链式反应（PCR扩增），或体外转录后，与芯片上固定的分子探针反应，样品中基因序列与探针互补的核酸分子就会与探针杂交，形成双链结构，通过一系列检测手段，可以实现对待测样品基因的大规模检测[10]。基因芯片在医疗诊断[11]、病原微生物检测[12]、农业研究[13]、食品安全检测[14]、转基因农作物检测[15]等领域都具有重要的应用价值。 该研究的下一步计划，是研究用于检测肉类掺假的基因芯片。首先，针对待测目标的特异性核酸片段设计引物探针，用于PCR扩增；其次，在基因芯片的PCR区实现PCR扩增；并且，在基因芯片的检测区固定捕获探针，用于检测扩增产物。基因芯片具有高通量，集成化的特点，可以同时鉴别多种肉类的来源，在肉类鉴别与肉类掺假检测方面可以发挥重要作用。 5 结语 该研究使用快速检测试纸检测肉类掺假，操作简便，检测时间短，适合对涉及肉类掺假的食品进行现场快速检测或筛查。并且为研究肉类掺假的基因检测试纸与基因芯片奠定了基础。该研究使用胶体金检测仪结合快速检测试纸的方法，不仅检测时间短，而且能够进行定量检测，提高了结果的灵敏度与准确性，适合对肉类食品中残留的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行现场快速检测或筛查。 参考文献 [1] ASHOOR S H，M ONTE W C，STILES P G.Liquid chromatographic identification of meats[J].Association of Omcia1 Analytical Chemists.1988，71（2）：397―403. [2] Kristin Hollung，Eva Veiseth，xiaohong Jia，et a1.Application of proteomics to understand the molecular mechanisms behind meat quality[J].Meat Science，2007，7l（1）：97-104. [3] 侯东军，杨红菊，姜艳彬，等.PCR鉴定牛羊肉中掺杂猪肉的方法建立[J].食品工业科技，2009，30（3）：328-330. [4] Lihua Liu，fur-Chi Chen，Jodee L Dorsey，et a1.Sensitive Monoclonal Antibody―based Sandwich ELISA for the Detection of Porcine Skeletal Muscle in Meat and Feed Products[J].Journal of Food Science，2006，7l（1）：1-6. [5] 金雁，姜莉，刘宁，等.高效液相色谱法同时测定猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、土霉素、四环素残留量的研究[J].现代仪器，2007，13（2）：65-67. [6] 申屠芬琴，强致懿，张素霞，等.猪肾脏等组织中盐酸莱克多巴胺的HPLC检测方法及其残留消除[J].畜牧兽医学报，2007，38（6）：589-594. [7] 王建平，沈建忠.猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究[J].畜牧兽医学报，2005，36（4）：397-401. [8] 申宏丹，窦红，高春平，等.直接竞争酶联免疫法检测莱克多巴胺研究[J].动物医学进展，2009（8）：58-63. [9] 何雷堂，卢明艳，马瑞林，等.盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测卡（试纸条）质量验证试验[J].畜禽业，2011（9）：60-62. [10] 刘思言，沈铖武，王丕武.基因芯片技术在植物中的应用研究进展[J].广东农业科学，2013，40（8）：136-138. [11] 苏凯，雷杰，张伟，等.应用基因表达谱芯片从抗脱落凋亡肺癌A549细胞中筛选转移相关基因[J].中国肺癌杂志，2010（1）：22-27. [12] 周小棉，梅晓丹，刘大渔.SARS病毒的微流控芯片实验室系统检测[J].现代科学仪器，2003（4）：13-16. [13] Hongmei Cai，Weibo Xie，Tong Zhu，et a1.Transcriptome response to phosphorus starvation in rice[J].Acta Physiol Plant，2012（34）：327-341. [14] 黄文胜，潘良文，粟智平，等.基因芯片检测转基因油菜[J]. 农业生物技术学报，2003，11（6）：588-592. [15] 祝儒刚，李拖平，宋立峰.应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌[J].食品科学，2012，33（14）：211-215.
会计审计对企业经济的影响分析摘要本研究首先对现代企业会计审计工作的特征及作用进行分析，然后对企业开展会计审计工作的必要性进行分析，然后对会计审计对企业经济效益的影响及具体对策进行着重阐述，旨在为更好地执行会计企业内部会计审计论文一企业内部经济责任审计结果公告制度的限制性因素我国第一次以法律的形式规定国家审计结果公告制度是在1994年颁布的中华人民共和国审计法中。在其后的相关国家审计法规准则中不断细化关于审浅析水利工程经济评价一水利工程项目比较方案的拟定为了对每个水利建设项目进行深入细致的经济分析，应拟定几个方案进行比较，然后选定其中最优的方案。拟定的各方案应具备下列的可比性第一，研究的深度基本一致第二分析马克思的哲学革命对学术话语体系建设的启示话语是按照一定的逻辑结构组合而成的完备的符号体系。与语言不同的是，话语反映一定的思维方式价值观念和权力结构，运用同一种语言可以有无限种话语形式，表达无限种价值观。近年来话语体系建设探究什么是哲学？哲学何为？文德尔班是新康德主义的大家，他的哲学史教程很早就翻译出版了，可以说是我们研究西方哲学史的必备教材。这一本哲学导论也是文德尔班的重要著作，体现了文德尔班晚年的主要思想，对于我们了解文谈县区级财政专项资金审计中发现的问题及对策摘要社会经济发展过程中，各类专项资金在公共财政支出中的比重逐年加大，其运行过程和使用效益受到了各级党委政府和社会公众的共同关注，如何分配管理和使用好这些资金，最大限度地发挥其经济效地方高校翻译人才培养模式的构建研究摘要随着我国高等院校复合型应用人才培养目标的制定和十三五规划的全面推进，各地方高校为满足社会发展和市场竞争的需求，不断地对传统的翻译教学模式和翻译人才培养方案进行改革和尝试，寻求符经济开发区技能型人才培养策略摘要随着我国经济的发展，各大城市都将技术开发列入了规划当中，其中经济开发区就是典型的技术培养基地。国家城市的发展离不开人才的支持，经济开发区以其独特的优势培养着一批又一批的知识人才高校后勤推行微代购服务可行性分析摘要微代购是互联网等网络技术及自媒体迅速发展的产物，对人们工作和生活产生了深远的影响，其依托互联网的多媒体服务终端完成对产品的介绍推销及交易。高校后勤自社会化改革以来，紧跟国民经济PPP融资模式在我国冬奥会项目建设中的应用研究摘要国际上公共设施建设项目融资中比较流行的ppp模式能有效解决融资问题，我国冬奥会运作过程中利用PPP融资模式具有可行性。为此，应联系实际完善相关法律法规，建立科学的风险分担机制。金融环境下金融会计风险防范措施摘要在世界经济大环境的影响下，我国社会主义市场经济不断发展和改革，金融体制会随着世界经济的发展而发展，波动而波动。现代经济发展的重点和核心是金融行业，而拥有良好的金融环境对金融行业