Wnt1诱导分泌蛋白1在直肠癌中的表达及其临床意义

　　毕业论文
　　作者：田超 周总光 孟文建 李立 于永杨 杨烈 雒洪志 周宾
　　【摘要】  目的 定量检测Wnt 1诱导分泌蛋白1(Wnt 1 induced secreted protein 1，WISP
　　1)基因在人直肠癌及远端正常直肠组织中的表达，为进1步研究该基因功能提供线索。方法 提取人直肠癌及癌旁正常直肠组织总RNA，采用实时RT PCR分析WISP 1的表达，再对PCR结果进行分析。结果 WISP 1 mRNA在直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常直肠组织，差异有统计学意义(P<0.0
　　5)。WISP 1的表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等因素有相关性。结论 WISP 1基因的异常表达可能与直肠癌的发生、发展有关，有望成为直肠癌诊断预后的标志物和治疗的新靶点。
　　【关键词】  Wnt 1诱导分泌蛋白1基因； 直肠肿瘤； mRNA
　　Expression of Wnt 1 induced secreted protein 1 in rectal cancer and its clinical significance
　　【Abstract】  Objective  To provide basis for further study of Wnt 1 induced secreted protein 1 (WISP
　　1) gene by quantitatively detecting its expression in rectal cancer tissues and distal normal rectal tissues. Methods  Real time RT PCR was used to detect the expression of WISP 1 mRNA in 86 samples of rectal cancer tissues and distal normal rectal tissues. Results  The average level of WISP 1 mRNA expression in rectal cancer tissues was 7.744 times than that in normal rectal tissues, with statistical significance (P<0.0
　　5). The level of WISP 1 mRNA expression was correlated with tumor differentiation, Dukes stage and lymph node metastasis. ConclusionsThe abnormal expression of WISP 1 gene may play an important role in the carcinogenesis and development of rectal cancer. WISP 1 may be helpful for prognostic evaluation and gene therapy in rectal cancer.
　　【Key words】  Wnt 1 induced secreted protein 1 gene;  Rectal caner;  mRNA
　　1  材料与方法
　　1.1  标本取材
　　收集4川大学华西医院普外科2003-2004年确诊的86例直肠癌患者资料，其中男44例，女42例。各病例分别取直肠癌组织以及相邻远端正常直肠黏膜组织。组织在离体30 min内取材， 并于液氮速冻置于-70  冰箱保存备用。所取标本均经病理检查证实。
　　逆转录酶M MLV为Takara公司产品； Trizol试剂为Gibco公司产品； DEPC、 DNaseⅠ、 RNase为Sigma公司产品；引物和探针由Takara公司合成。
　　1.3  总RNA提取及逆转录反应
　　1.4  实时RT PCR反应
　　1.5  扩增效率及产物分析
　　1.6  统计学分析
　　用相对表达软件工具 XL［4］对RT PCR结果进行分析，揭示直肠癌组织及正常直肠组织两组间WISP 1的表达是否有差异。利用SPSS 11.0软件包中Chi 检验和秩和检验分析WISP 1与临床病理指标之间的关系。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2  结果
　　2.1  总RNA电泳检测及定量
　　2.2  RT PCR扩增效率和线性关系
　　GAPDH及WISP 1扩增效率分别是1.61及1.85。线性关系为r=1。
　　2.3  WISP 1基因在直肠组织中的表达
　　86例直肠癌样本中有56例过度表达，其中有17例直肠癌中的表达是正常直肠组织的1 5倍，有5例是6 10倍，有34例是超过10倍。REST 结果显示在直肠癌中WISP 1的平均表达水平是正常直肠组织的7.744倍，两组表达量的差别有统计学意义(P<0.0
　　5)，说明WISP 1基因在直肠癌中的表达上调。
　　2.4  WISP 1基因水平与临床病理指标的关系
　　它与直肠癌的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移有关，与年龄、性别及CEA等临床病理因素无明显相关性(表
　　1)。表1  86例直肠癌患者Wnt 1诱导分泌蛋白1表达水平与临床病理资料的关系（略）
　　3  讨论
　　【参考文献】
　　［4］Pfaffl MW, Horgan GW, Dempfle L. Relative expression software tool (REST ) for group wise comparison and statistical analysis of relative expression results in real time PCR. Nucleic Acids Res,2002,30
　　(9):e36.