液相色谱中的各种体积到底都是些什么？

　　大家在阅读液相色谱的文章的时候，经常能够看到各种名字的＂体积＂，比如死体积、驻留体积、延迟体积、孔隙体积、空体积、滞留体积、柱体积、柱外体积、扩散体积等等等等，简直是让人头昏眼花……
　　这些形形色色的＂体积＂到底都是些什么东西？它们对我的液相分析到底意味着什么呢？
　　今天我们就带大家一起来看看。
　　首先要说的是，液相色谱溶剂从溶剂瓶出发、最终从检测器出来去到废液桶，中间会经过各个模块的各种管路，上面提到的这些不同＂体积＂的概念，就是不同管路的各种集合。
　　接下来，从这些体积的意义，或者对于液相分析的影响来看，它们主要可以分成两个大的部分，对于 流动相的影响 ，以及对于 样品的影响 。
　　01 关键词：延迟体积
　　我们首先来看 对于 流动相 的影响 。
　　相信绝大多数使用液相的同学都是使用 梯度方法 ，当然也使用泵来在线混合流动相的。我们也知道流动相的比例的改变会改变它的洗脱强度，从而改变样品的出峰时间和分离度。但是，流动相的比例的改变是需要到色谱柱上面才能对分离产生影响的。
　　（点击观看视频＂单元泵、二元泵、四元泵分别都是什么原理＂）
　　这样从流动相混合点开始，到色谱柱的柱头这中间所有的体积，就叫做延迟体积（Delay Volume），因为流动相比例的变化因为这一段体积而被延迟了。
　　有时候，这个体积也被叫做 梯度延迟体积 （Gradient Delay Volume）、 驻留体积 （Dwell Volume），有时候这个Dwell Volume也被翻译成 滞留体积 ，这个是容易让人产生混淆的地方，因为 这里的滞留是指的流动相的滞留 ，稍后我们还会讲到样品的滞留。
　　02 关键词：空隙体积
　　接下来是体积对于 样品的影响 。
　　大家都知道，样品一旦进入了液相系统，被流动相带着往前运动的过程中，自身也会因为热力学运动产生扩散，所以在等度液相的条件下， 越往后出的峰，峰宽一般都越宽 。
　　（点击观看视频＂如何获得最窄的峰宽，最佳的柱效＂）
　　一般来说，样品由自动进样器引入系统，可能经过了自动进样器内部的一些管路后，通过进样器到柱温箱的色谱柱。色谱柱的体积包括了 填料的体积 、以及 填料间空隙的体积 。
　　一般对于多孔硅胶填料的色谱柱来说，填料之间的体积占到了色谱整体体积的 60%左右 。我们一般把这部分叫做 色谱柱的空体积/空隙体积 （Column Void Volume）或者 填料间体积 （Interparticle Volume）。
　　03 关键词：滞留体积、死体积
　　在色谱柱中，样品也会在硅胶小球的空隙中持续地运动扩散。这种扩散会一直持续到检测器的流通池。整个这段样品扩散的体积就叫做液相色谱的 滞留体积 （Holdup Volume），或者是 系统空体积/空隙体积 （System Void Volume）。
　　请注意，这里是针对 样品的滞留 来说的，它包括了色谱柱内部填料空隙的体积（Interparticle Volume），以及从进样点到被检测到的所有的管路和接头的体积。后面这部分也别叫做 柱外体积 （Extra-Column Volume）或者 死体积 （Dead Volume）。
　　04 关键词：馏分收集的延迟体积
　　大多数时候，样品只要从检测器出来了，我们就不关心了它了，所以我们也不太去关心废液管的体积了。
　　但是只有一种情况例外，就是色谱分离检测到的样品，我还想要使用 馏分收集器 去把这些分开的化合物收集起来，去做进一步的分析。我们把这样的液相叫做 制备液相 。
　　（点击观看视频＂制备液相与分析液相有什么不同＂）
　　馏分收集器都是跟检测器配合起来工作的，一旦检测器检测到有样品过来，就会告诉馏分收集器准备好去收集了。
　　但是它们之间是有一个时间差的，原因就是从检测器到馏分收集器之间的管路的体积。
　　这个体积，通常也被叫做 延迟体积 （Delay Volume），不过请注意这个是指的样品从检测器到馏分收集器的延迟，跟之前提到的流动相的混合的延迟完全不是一会儿事儿。