关于液相色谱峰的拖尾问题

　　同学们如果仔细查看色谱图，就会发现几乎每一个色谱峰都有一定程度的 拖尾现象。
　　这本不是问题，但是当拖尾严重到一定程度就会影响我们的分析结果，所以今天就让我们来谈一谈关于液相色谱峰的拖尾问题吧！
　　什么是拖尾峰
　　前沿陡峭，后沿较前沿平缓的不对称峰，称为 拖尾峰。
　　下图就是一个拖尾峰，我们会发现这个 峰的右半边峰宽是大于左半边峰宽的 ，尤其在基线处更加明显。
　　那如何评价色谱峰的拖尾呢？
　　绝大多数情况下制药行业的从业人员会选择用美国药典（USP）中 拖尾因子(Tf)来评价，而其余的分析行业内人员则会选择用 对称因子（As）来评价。
　　关于这两个因子的计算，我们之前就有相关的视频介绍，大家可以回顾一下：
　　拖尾因子和对称因子到底什么关系？
　　其中，拖尾因子Tf=(a+b)/2a，a和b分别是5%峰高处的左右半峰宽。
　　对称因子As=d/c，其中c和d分别是10%峰高处的左右半峰宽 。
　　如果a=b，c=d，那么拖尾因子和对称因子的数值都等于1，也就是该峰不拖尾。
　　实际工作中，当拖尾因子和对称因子小于2时，这两个值是非常接近的，如下图所示。
　　拖尾峰
　　会对工作造成什么影响
　　1 影响峰高的计算 先来看看第一个峰（Tf=1.0）和最后一个峰(Tf=3.5)，它们的峰面积虽然是相同的，但是由于最后一个峰拖尾很严重，所以它们的峰高相差三倍。当我们使用峰高来计算最低检出限时，拖尾峰的负面影响就会比较明显。 2 影响峰面积的计算 当我们对色谱峰进行积分来计算峰面积时，峰的起点和终点通常情况下通过色谱峰的斜率来确定。色谱峰越拖尾，它的尾部基线越平缓，终点就越难确认。这一点在基线波动较大时体现的更加突出，那么它就会影响我们积分得到的峰面积。 3 影响对某些痕量组分的确认 在药典计算有关物质的相关要求中会提到，峰面积达到主峰面积0.1%的组分都要参与计算。那么当一些小峰和前面的峰分离度不是很好时，就会容易被隐藏在前面峰的拖尾处从而无法参与计算。综上所述，拖尾峰会对色谱分析的定性定量结果都会产生影响。
　　产生拖尾峰的原因是什么
　　01
　　拖尾峰的形成是因为在色谱分离时 出现了一种以上的保留机制，并且其中一种保留机制是超负荷的。
　　在日常分析中大多数情况下会使用反相色谱，以常用的C18柱为例，C18是被键合在载体硅胶表面的，而硅胶是由硅和氧聚合而成的，所以它的表面会出现各种形态的硅羟基。
　　虽然理想的状态是流动相中的样品只和固定相C18发生作用。而实际上一半以上的硅胶表面并没有被键合上C18，所以硅胶表面会裸露出大量的硅羟基（Si-OH）。
　　而单独的自由硅羟基会和流动相中的样品发生作用，形成拖尾。
　　于是在最近的十几年中，色谱柱供应商致力于生产出高纯度的硅胶载体。由于新型硅胶在无金属离子环境下制造，所以表面不会残留金属离子也会减少拖尾。
　　另外，硅胶表面尽可能减少自由的硅羟基，未与固定相键合的硅羟基尽可能形成螯合或聚合状态，用来减少拖尾峰的产生。
　　02
　　当色谱柱经历过高温、强酸，或者一些极端使用方法导致 固定相流失较多后，色谱柱中的自由硅羟基也会变得越来越多，从而更加容易造成拖尾峰
　　03
　　拖尾峰的形成也有可能是因为 柱外的死体积较多，导致样品在死体积处发生了滞留和扩散。
　　04
　　当样品中出现了 碱性化合物，碱性基团更容易与色谱柱中硅羟基发生作用形成拖尾峰。
　　如何改善拖尾峰
　　01
　　对于过去的自由硅羟基较多的色谱柱，建议在流动相中加入 三乙胺来抑制拖尾。实验表明三乙胺有非常好的拖尾抑制效果。
　　另外，由于三乙胺呈碱性，需要大家在使用时考虑色谱柱的ph值耐受范围，某些情况可能需要加入酸性调节剂。
　　对于新型的表面以耦合和聚合硅胶为主的硅胶载体，我们就很少使用三乙胺来抑制拖尾，而是通过 调整流动相的ph<3来抑制硅胶的离子化。
　　02
　　当色谱柱柱效降低导致拖尾峰时建议 更换色谱柱。
　　03
　　建议在液相色谱中正确安装并且使用 与您的仪器匹配的管线接头，以减少死体积的产生。
　　~~~
　　同学们，今天的拖尾峰相关问题不知大家还有没有更多的理解和建议呢？欢迎大家踊跃留言哦~