结合内皮细胞和成纤维细胞的电纺支架的预播种可促进血管生成

　　Tissue Eng. Regen. Med.：结合内皮细胞和成纤维细胞的电纺支架的预播种可促进血管生成
　　DOI:10.1007/s13770-020-00263-7 将促血管生成细胞引入组织工程（TE）构建体（血管形成前）是一种很有前途的方法，可以克服此类构建物在植入后的延迟新生血管形成。因此，在这项研究中，检测了人皮肤微血管内皮细胞（HDMECs）和人皮肤成纤维细胞（HDFs）的单独作用，以及它们在鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）分析中对新血管形成的贡献。首先对聚-3-羟基丁酸酯-共-3-羟基戊酸酯（PHBV）和聚己内酯（PCL）的物理、机械和生物学性能进行了研究。然后研究了明胶涂层和共培养条件对增强内皮细胞活力和生长的影响。最后，在简单电纺PHBV支架上分离或间接共培养后，使用CAM分析法从宏观和组织学角度评估了HDMECs和HDFs的血管生成潜能。PHBV对HDMECs的细胞代谢活性略优于PCL。PHBV支架的明胶涂层以及HDMECs与HDFs的共培养均显示出对HDMECs生存能力和生长的积极影响。在CAM实验中，两种细胞类型无论是分离还是共培养均能在7天内诱导血管生成。与HDFs引入相比，将HDMECs引入支架导致植入区域产生的血管更多，但HDMECs和HDFs的共培养具有最显著的血管生成活性。研究结果表明，单独或共培养HDMECs和HDFs的TE构建体体外预血管化可促进移植TE构建体的血管生成。
　　图1.PHBV和PCL的机械和物理性能汇总。A）接触角测量，B）代表性应力-应变曲线，C）SEM图像显示了电纺PHBV和PCL支架的超微结构，D）PHBV和PCL支架的机械测试结果
　　图2.与在TCP上培养的细胞相比，在PHBV和PCL上培养的HDMECs在11天内的代谢活性。***p≤0.001；*p≤B0.05；ns p≥0.05，误差线表示标准偏差（SD）
　　图3.宏观图像和组织学图像显示了CAM分析对PHBV和PCL电纺膜的响应。下图显示了植入PHBV或PCL时胚胎的存活率。比例尺为3 mm和200μm，分别代表宏观图像和组织学图像
　　图4.使用AlamarBlue分析评估明胶涂层和HDFs间接共培养7天内对HDMECs代谢活性的影响
　　图5.分离或共培养HDFs（用CellTrackerTM Green标记）和HDMECs（用CellTrackerTM Red标记）的细胞化PHBV支架植入CAM前的横截面，用于评估血管生成活性。比例尺为100μm
　　图6.代表图像显示了用HDMECs或HDFs或HDMECs细胞化的PHBV支架在用HDFs间接培养中的血管生成潜力。下图显示了通过宏观和组织学分析支架的量化结果。对于宏观图像和组织学图像，比例尺分别为3 mm和250μm。黑色和绿色箭头分别指示PHBV支架和血管。***p≤0.001；**p≤0.01；p≤0.05，n=6±SD
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