透射电镜观察生物样品，负染是必须的吗？

　　负染是在使用传统透射电镜对生物样品成像时＂不得不＂采用的样品处理手段，负染的处理手段会带来诸多的问题。负染会导致生物样品制样复杂，样品容易产生收缩、膨胀、破碎以及内含物丢失等结构改变，重金属盐离子本身会对生物样品的形貌造成不可逆的损害，且负染液在电镜观察时容易产生＂假象＂。负染的操作对于制样者的要求较高，生物样品的种类多种多样，而每一种生物样品负染时佳的制样条件（重金属盐溶液的种类、浓度、染色的时间长短等）都不一样。这就需要制样人员根据各自实验室的条件，在长时间地摸索与多次地试错来获取佳的制样条件，大量宝贵的时间和样品就这样浪费在负染制样条件的摸索中了。
　　在透射电子显微镜成像实验中，生物样品的成像操作为复杂，成像难度大。这主要是因为传统透射电子显微镜过高的加速电压引起的。
　　各种元素在传统透射电子显微镜的不同照射电压的反冲能量统计图
　　上图可以发现电子束加速电压在20 kV就已经到达了碳碳单键的临界反冲能量，超过就很有可能使碳碳单键发生断裂，即使强的碳碳三键的临界反冲能量也仅仅在80 kV，这也是为何大多数生物样品在电镜观察的时候使用了透射电子显微镜的低电压80 kV。因此，传统透射电子显微镜在对由C/H/O/N等元素组成的生物样品进行成像时就需要使用重金属盐离子进行负染。
　　Delong公司推出的LVEM5生物型透射电子显微镜，很好地解决了以上问题。LVEM5生物型透射电镜采用的5kV低电压设计，对生物样品不会造成任何损伤，与传统高压电镜相比，低电压反而提高了生物样品成像的衬度/反差；无需重金属染液负染，对生物样品成像条件温和，摆脱了染液与负染过程本身可能对生物结构造成的损害，所得图像为＂正像＂，更加真实地展现生物样品的结构特征。
　　Quantum Design-低电压台式透射电子显微镜-LVEM5（生物领域）
　　上图分布为传统电镜和LVEM5生物型透射电镜对未染色的小鼠心肌切片（上）和有机纳米颗粒（下）的成像实例。可以看到，传统高压透射电镜本身就会带来样品细节损失，在80-120kV下的透射电镜成像过程中，未染色的生物样品和大量十几纳米尺寸的颗粒会直接被＂击穿＂。而LVEM5生物型透射电镜采用的5kV低电压设计，不仅避免了传统高压透射电镜长时间照射对于生物样品的损害，还可以保留下更多地小有机颗粒图像，获得更多地细节。
　　LVEM5生物型透射电镜可以对外泌体、脂质体、噬菌体、病毒、细胞切片等生物样品进行无负染成像，所得的图像衬度更高。如下图所示。
　　LVEM5技术特点
　　高衬度：低能量电子对有机分子产生更强烈的散射，具有更高对比度。
　　无需染色：突破以往生物/轻材料成像需要重金属染色的局限性。
　　高分辨率：无染色条件下能够达到1.5 nm的图像分辨率。
　　多模式：LVEM5能够在TEM、SEM、STEM三种模式中自由切换。
　　高效方便：真空准备只需要3分钟，空间小，环境需求低。
　　易操作且成本低：友好智能化操作界面，低耗材，低维护费用，无需专业操作人员。 设备咨询
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