分子克隆的常用技术
蛋白质分子克隆是指将一种或多种基因序列片段导入能够对其进行拷贝并根据基因序列可能修饰和表达的适宜宿主中的过程。它可以使人们将未曾存在于某一指定基因组中的基因带入该基因组,以便于形成新型蛋白质。分子克隆常用的技术包括:
1。利用载体质粒(Plasmid)进行克隆:该技术使用可重复写入和重复读取的载体质粒,以承载和传输所需的基因序列片断。通过使用多种酶,如酶切、连接酶,可以构建重组质粒,并在宿主细胞中表达。
2。使用质粒BAC进行克隆:该种技术利用可复制的质粒BAC(大基因组体杆菌质粒),以传输和储存所需的基因序列片断。该方法通常使用病毒和酶切酶来进行基因组的修饰和序列的克隆。
3。重组DNA技术:克隆通过重组DNA技术完成,涉及在2个不同的基因序列片段之间的DNA交换。
4。体外基因合成:体外基因合成技术使用核苷酸酶合成对应于所需基因序列的DNA链,然后将其引入质粒。
分子克隆常使用的试剂、耗材和仪器设备包括:分子生物学试剂,包括载体、酶、感受态细胞、PCR引物等;操作耗材,如:管子、孔板等;仪器设备,包括PCR仪、电泳仪、紫外吸收光度计等。
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