人类基因组DNA提取
一、人类基因组DNA提取实验简介:
人类基因组DNA提取实验中所用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,添加SDS破坏核膜,使用蛋白酶K将核蛋白降解为小片段,然后从DNA上解离,通过苯酚-氯仿提取去除蛋白质,然后用无水乙醇,75。用%乙醇洗涤DNA沉淀物,真空干燥,并溶解在TE中以获得高分子量DNA。
二、人类基因组DNA提取实验所需试剂:
1.5ml Ep离心管 , 蛋白酶K溶液 , NaAc , 1000ul蓝吸头
三,人类基因组DNA提取实验步骤:
1.细胞分裂和RNase /蛋白酶K消化
①将100 微升 抗凝全血放入1.5ml Ep离心管中,然后加入100 微升 裂解物和20 微升 RNaseA /蛋白酶K溶液,来回吸打混合,并在55°C孵育35 min 将离心管倒置来回几次直到溶液是水溶性的。
②加入10 微升 的3M NaAc(pH 4.8),然后加入1250 微升 的结合缓冲液,充分摇匀以在12,000 rpm下离心30秒。
2. DNA与吸附柱结合
用移液管转移上清液,并将其加入离心吸附柱(设置收集管)中,静置1 min 以 离心12,000 rpm 30秒,然后将废液丢弃在收集管中。注意:待转移的上清液约为1300 微升 ,而离心吸附柱的容量约为650 微升 ,因此每次需要将650 微升 的上清液转移至离心吸附柱,进行离心处理,将废液丢弃在收集管中,然后重复实验操作步骤3。
3. DNA的纯化
①在离心吸附柱(设置收集管)中加入600 微升 洗涤缓冲液(洗涤缓冲液),以 离心12,000 rpm 30秒。
②重复步骤4一次,以 离心12,000 rpm 3分钟以完全除去洗涤缓冲液。
③小心取出离心吸附柱,弃去收集管,将离心吸附柱放入干净的1.5ml Ep离心管中,向离心吸附柱添加50 微升 分离缓冲液(洗脱缓冲液)(代替缓冲液,必须添加在离心吸附柱的中央)静置1 min, 以 离心12,000 rpm 30秒。
④取出装有提取的基因组DNA的Eppendorf离心管。
4. DNA的琼脂糖凝胶电泳
取8-10 微升 基因组DNA,加入2 微升 上样缓冲液,充分混合,将样品加入1%琼脂糖凝胶斑点中,然后进行电泳。
贾跃亭一直活在大家的段子里,如今烧光了400亿元还想怎样?自下周回国后,贾跃亭就一直活在大家的段子中,毕竟老贾吹的牛没怎么实现,倒是欠了一屁股债,此后也只好把全部的心血寄托于FF91。可遗憾的是,自2017年发布首款电动车FF91以来,老
顺丰电商崩了双12前后,顺丰因为小程序和网页无法正常使用而两次登上微博热搜,顺丰崩了一时间成为人们热议的话题,与此同时运输时间过长派送不及时等服务方面的吐槽也一并涌了进来。一些不明觉厉的网友可
为什么1000的播放量没有钱呢300的播放量有0。01的巨款,而1000的播放量一分钱都没有,想知道原因,有知道的友友吗世界十大名牌包包分享Herms创立于1837年法国,世界知名奢侈品品牌。以精湛的手工技艺传
蒙冤入狱7年,60岁干出一个IPO60岁张文中的二次创业,要成功了。来源投资家(IDtouzijias)作者老高60岁张文中的二次创业,要成功了。投资家网获悉,一站式全渠道数字零售解决方案服务商多点Dmall近日向
严为民全天缩量运行,更添一分悲观!如果说昨天的大阴线让部分朋友还觉得下方的缺口会有支撑,60日均线在3080点构成双重防线,但是当再一根阴线洞穿防线的时候,朋友们应该有所警惕。要知道经过九天的调整,市场再度靠近20
继拉尔萨之后,安东尼前妻也穿透视裤,效仿卡戴珊造曲线近段时间,皮蓬的前妻拉尔萨与乔丹的儿子马库斯频繁约会,两人多次深夜外出的画面被媒体曝光,吃瓜球迷包括美国八卦媒体在内,一致认为48岁的拉尔萨和31岁的马库斯已经发展成为伴侣的关系。
梅西夺冠,最高兴的可能是这只极兔不用差评君再多废话,相信今天的大伙们,已经被梅西举起大力神杯的推送给塞爆了。世界杯含量爆棚的微博热搜,也告诉了大家,什么是世界第一运动的含金量。而随着阿根廷队的夺冠,卡塔尔世界杯这
工信部出手!手机预装App终于能卸载了2023年执行相信大家都曾有过这样一个困惑,为何刚买的智能手机中会有很多卸载不掉的预置软件?基本功能软件无法卸载尚可理解,但预装很多我们平常根本用不到却又无法卸载的软件,无疑是厂家欺瞒消费者的霸
2022年了,1800买了台iPhoneXsMax,内行人告诉你值不值在2022年花1800买iPhoneXsMax是种什么体验。前端时间因为缺少一台备用机,就买了一台二手的iPhoneXsMax,很多朋友可能会困惑,为什么要选一款这么老的手机。首先
有啥别有病,没啥别没钱,缺啥都别缺德!世间有因果,万事有轮回!人在做,天在看,举头三尺有神明。若想人不知,除非己莫为,你做了什么,骗得了别人,骗不了自己,更骗不了老天,老天看得一清二楚。做人,别缺德,别作恶,因为,人在
爱了一次,念了一世,默默爱你到底,深深想你一世你的心中有没有一段往事,回不去,忘不了,缱绻今生?你的心中有没有一个人,天天想,夜夜念,百思不厌?前尘岁月,在你未曾出现之前,我的世界是一个萧瑟的冰封世界,眼中看不到花开的美丽,耳