本文作者：杜勇、陈宇、李浩渤 单位：河北医科大学第二医院口腔内科、河北省廊坊市人民医院口腔科 口腔扁平苔藓(orallichenplanus，OLP)是口腔黏膜一种常见的非感染性慢性炎症，目前被认为是细胞介导的自身免疫性疾病。国内外研究相继表明OLP具有癌变倾向，其癌前性质引起广泛关注［1］。Fascin蛋白是一种细胞骨架蛋白，Fascin蛋白的异常表达可引起肿瘤细胞运动性显著增强和细胞黏附能力的改变，使肿瘤细胞具有更强的侵袭性，进入淋巴间隙，淋巴管和血管，增加转移几率。研究发现fascin蛋白在多种肿瘤组织和癌前病变组织中呈现阳性表达，其阳性表达的肿瘤组织学分级或者侵袭性往往较高［1－3］。进一步的研究发现Fascin蛋白在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中呈现过高表达［4，5］。本研究通过免疫组化的试验方法检测fascin蛋白在OLP中的表达，进一步探讨OLP癌变的发病机制，为OLP癌变的早期诊断和治疗提供依据。 1资料与方法 1．1一般资料 收集河北医科大学第二医院1995至2009年OLP蜡块标本52例(所有患者在取标本前未经任何治疗)为试验组(OLP组)，每例标本均进行HE染色后经有经验的病理医师阅片后确诊。其中男28例，女24例;年龄38 73岁，平均年龄52．6岁。正常口腔黏膜组织41例为对照组(NM组)，均取自囊肿旁及牙槽骨整形手术时切除的正常黏膜组织，每例均进行HE染色后经有经验的病理医师阅片后确诊。其中男22例，女19例;年龄21 68岁，平均年龄31．6岁。2组一般资料有均衡性。 1．2主要试剂与仪器 试剂:SP免疫组化试剂盒、一抗(购自博士德分装抗体)、二氨基联苯剂(DAB)显色剂、多聚赖氨酸(Poly-L-lysine)防脱片剂均购于河北博海生物有限公司。仪器:显微镜(日本奥林巴斯BX51T-PHD-J11)、CMOS(日本奥林巴斯)、多功能真彩色细胞图象分析管理系统(美国MediaCy-bernetics公司Image-ProPlus)、切片机(德国莱卡RM2015)、离心机(北京离心机厂LDZ5-2型)、电子天平(瑞士METTERAE100型)、移液器(德国EPPENDORF)、干燥箱(日本三洋MIR-153型)、低温冰箱(日本三洋MDF-382E型)、恒温水浴箱(江苏太仓医用仪器厂DSHZ-300型)、医用微波炉(浙江临安爱迪仪器厂YWY781B型)。 1．3对照试验 用已知的Fascin蛋白阳性的口腔鳞癌标本作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。 1．4试验方法 采用免疫组织化学SP法(过氧化物酶标记的链酶卵白素法)。所有标本均经10%甲醛固定，石蜡重新包埋后，将每个蜡块切为5μm的切片，共切3张，1张HE染色，1张作为阴性对照，1张Fascin蛋白染色。 1．5结果判定 Fascin蛋白染色判定参照Hashimoto的标准，以细胞膜和细胞浆显示弥漫性棕黄色颗粒为阳性染色，每张切片随机计数10个高倍视野，每个视野计数100个细胞。据阳性细胞百分率判定:(1)未见棕黄色颗粒为阴性;(2) 25%为弱阳性(+);(3)25% 75%为阳性(++);(4) 75%为强阳性(+++)。1．6统计学分析应用SPSS17．0统计软件，计数资料比较采用2检验，P 0．05为差异有统计学意义。 2结果 2．12组Fascin阴性率比较 黏膜标本中均呈阴性表达;NM组标本呈现弱阳性表达(阳性细胞数 25%)，细胞膜和细胞浆显示弥漫性棕黄色颗粒，其余均呈现阴性表达，阳性率为9．62%，阳性率高于NM组(2=4．166，P 0．05)。图1、2。 2．2OLP组Fascin蛋白与性别、年龄的关系 在性别和年龄的对照中，fascin蛋白在口腔扁平苔藓中的表达差异无统计学意义(P 0．05)。见表1。 3讨论 Fascin蛋白在细胞的迁移、黏附等过程中发挥重要作用。Fascin蛋白能够与F-肌动蛋白结合成平行有序的束状结构，这种结构能够有效地加强肌动蛋白细胞骨架，抵抗细胞迁移时由细胞突起的运动引起的细胞膜延伸，从而对细胞移动起着重要作用。Fascin蛋白的表达与肿瘤的分化增殖、细胞迁移及浸润侵袭密切相关，为肿瘤早期诊断和预后的判定提供重要的依据。研究证实Fascin蛋白在正常黏膜中不表达或低表达，而在癌组织中高表达［1－3］。国内试验证实口腔鳞状细胞癌的Fascin蛋白表达显著高于正常黏膜组织［4，5］。王德明［5］还发现在癌旁正常的口腔黏膜组织中也有Fascin蛋白的表达，12例口腔黏膜良性增生组织中2例出现Fascin蛋白表达。但未见报道在癌前病变OLP中Fascin蛋白的`表达情况。本实验应用免疫组织化学法检测了Fascin蛋白在41例正常口腔黏膜标本和52例OLP标本中的表达。NM组中Fascin蛋白均呈阴性表达;OLP组中5例标本呈现弱阳性表达(阳性细胞数 25%、细胞膜和细胞浆显示弥漫性棕黄色颗粒)，其余均呈现阴性表达，阳性率为9．62%，阳性表达率高于正常口腔黏膜(P 0．05)，这与以往的研究［6］相近，正常食管黏膜中Fascin蛋白呈阴性表达或低表达，而在癌前病变食管黏膜的不典型性增生中Fascin蛋白呈现阳性表达，随着食管癌的发展Fascin蛋白的阳性表达是逐渐增强的。本实验结果显示OLP中Fascin蛋白的阳性率高于正常口腔黏膜，说明OLP存在潜在恶变的可能，Fascin蛋白可能在OLP恶变的过程中发挥一定的作用。但尚不能揭示Fascin蛋白与OLP恶变存在直接关系，Fascin蛋白在OLP恶变发生发展中的具体作用机制仍需要进一步的研究。