探究小儿咽扁颗粒含量测定方法

　　1介绍
　　小儿咽扁颗粒为中药复方制剂，其主要成分为金银花、射干、桔梗、人工牛黄、麦冬等，功能：清热利咽，解毒止痛。用于肺实热引起的咽喉肿痛，咳嗽痰盛，咽炎喉炎等。其中金银花为清热解毒、治疗喉痹的主要药物。金银花主要成分为绿原酸（花中可达5），控制其含量十分重要。绿原酸具有抗氧化、抗菌抗病毒、治疗心血管疾以及抗癌变、免疫调节等作用。通过对不同检测波长、流动相、提取时间、提取溶剂、提取方法、溶剂用量的试验以及各种方法的结果准确度、精密度、稳定性和重现性的考察，确定了高效液相方法测定绿原酸含量的可行性，并选择出最佳测定方法。1试验材料
　　试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈0。4磷酸溶液（12：88）为流动相，柱温30，流速1。0mlmin，检测波长为385nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0。084mg的溶液。供试品溶液的制备：精密取本品1g，置具塞锥形瓶中，精密加50甲醇50ml，称重，超声处理20min后，放冷至室温，再次称重，用50甲醇补充减失的重量，摇匀，用0。45m微孔滤膜滤过，即得
　　2试验方法及结果
　　2。1检测波长的选择取绿原酸对照品适量，用甲醇溶解并稀释成每1ml含0。084mgml的溶液，在190nm400nm的波长范围内扫描，本品在327。8nm处有最大吸收，与中国药典金银花（含量测定）项下测定波长（327nm）相近，为保持一致，故选择327nm作为本品的检测波长〔1〕。
　　2。2流动相的选择流动相：乙腈0。4磷酸溶液（12：88）；柱温：30；流速：1mlmin；在此条件下绿原酸与其他组分均达到基线分离，而且峰形较好。
　　试验中曾用以下流动相进行试验：乙腈0。4磷酸溶液（13：87）（药典金银花《含量测定》项下流动相），但绿原酸与相邻峰尚未达到基线分离。
　　2。3供试品溶液的制备
　　2。3。1提取时间的考察精密称取本品1。000g（3份），分别加入甲醇50ml，称重，分别超声处理20、30、50min，放冷，用甲醇补充减失的量，摇匀，滤过，即得。吸取上述供试品溶液10l按拟定的条件测定。
　　2。3。2提取方法的选择精密称取本品2份：精密加入甲醇50ml，称重，分别超声提取50min，放冷，称重，用甲醇补充减失的量，摇匀，滤过，即得。精密加入甲醇50ml，称重，回流提取50min，放冷，称重，用甲醇补充减失的量，摇匀，滤过，即得。吸取上述各供试品溶液10l按拟定的条件测定，结果表明，超声20min提取效果较好。
　　2。3。3提取溶剂的选择精密称取本品1。0000g2份：分别加入下表不同溶剂50ml，超声处理20min，放冷。分别用不同溶剂补充减失的量，摇匀，滤过，即得。吸取上述各供试品溶液10l按拟定的条件测定，结果表明，50甲醇提取效果较好。
　　2。3。4溶剂用量的考察精密称取1。0000g3份：精密加入50甲醇30ml、50ml、60ml，称重，超声处理20min，放冷，称重，用50甲醇补充减失的量，摇匀，滤过，即得。吸取上述各供试品溶液10l按拟定的条件测定，结果表明，50ml与60ml提取效果差异较小。依据以上测定结果，综合考虑提取效果，最终选择50甲醇50ml超声处理20min作为本品的处理方法。
　　2。4阴性溶液的制备依据上述色谱条件分别吸取供试品溶液、50的甲醇溶液、对照品溶液各10l进行测定，供试品溶液和对照品溶液在相同的保留时间各有一个色谱峰，而50的甲醇溶液在此保留时间无色谱峰〔2〕。
　　2。5线性关系考察精密吸取对照品溶液（0。084mgml）1l、3l、6l、8l、14l按已拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，绿原酸的量（g）为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：y59。040x3。8625，r0。9999。实验表明，绿原酸在0。0841。176g范围内呈良好的线性关系。
　　2。6精密度取绿原酸对照品溶液，连续进样5次，每次6l，记录色谱图。结果表明，仪器的精密度良好。
　　2。7稳定性试验取同一份供试品溶液10l，分别在0、2、4、6、8h进样一次，考察样品溶液的稳定性，计算相对标准偏差，结果表明，供试品溶液在8h内基本稳定。
　　2。8重现性实验精密称取样品（20071118）五份，制成供试品溶液，按拟定的色谱条件测定峰面积，并计算含量，计算相对标准偏差5，结果表明，本方法的重现性良好。
　　2。9加样回收率取已知含量的小儿咽扁颗粒（20071118）五份，分别添加绿原酸对照品适量，制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，按以下公式计算回收率，结果表明，本法具有良好的回收率。回收率100
　　2。10样品测定分别精密吸取供试品溶液各10l，依上述色谱条件测定，依据绿原酸标准曲线计算含量。根据以上三批样品中测得的绿原酸含量，暂定本品中含金银花以绿原酸（C16H18O9）计，不得低于0。65mgg。
　　3讨论
　　本品为中药复方制剂，其中金银花为本品中主要药物之一。金银花主要成分为绿原酸，为进一步控制本品的质量，选择绿原酸为含量测定指标，采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量。本品原标准中，没有含量测定项，按此工艺条件制得的成品难已保证确切的疗效和均一的内在质量。为克服这些缺陷，并对成品的质量控制进行了提高研究，并建立了绿原酸的高效液相含量测定方法，使其具备了较详细的工艺参数和质量控制指标，保证了药品的优良品质和确切的临床疗效。
　　根据实验结果得出实验结论为：此方法可以作为控制小儿咽扁颗粒产品的定量分析方法，而且此方法重现性和稳定性良好。