谈黄连水提液中盐酸小檗碱含量检测方法的建立

　　黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao 或云连Coptisteeta Wall. 的干燥根茎，以上三种分别习称味连、雅连、云连，秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥，摘去残留须根，具有清热燥湿、泻火解毒之功效，用于湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、心悸不宁、血热吐衄、目赤、牙痛、消渴、痈肿疔疮;外治湿疹、湿疮、耳道流脓。酒黄连善清上焦火热，用于目赤、口疮;姜黄连清胃、和胃、止呕，用于寒热互结、湿热中阻、痞满呕吐;萸黄连舒肝和胃、止呕，用于肝胃不和、呕吐吞酸。笔者等采用高效液相色谱法对黄连水提液中盐酸小檗碱的含量进行了测定，建立了专一性强、重复性好的测定方法。
　　1 材料与方法
　　1.1 仪器
　　高压液相色谱仪(沃特世有限公司);超纯水(上海力新仪器有限公司);针筒式微孔滤膜过滤器(天津市科亿隆实验设备有限公司);盐酸小檗碱(批号：E-0295，购自上海同田生物技术股份有限公司);黄连(购自北京同仁堂);乙腈、甲醇(色谱纯，天津市光复精细化工研究所)。
　　1.2 方法
　　1.2.1 色谱条件博纳艾杰尔色谱柱(5 m，150 mm4.6 mm);流动相为乙腈-0.03 mol/L 磷酸二氢钾(30 70);流速为1.0 mL/min;检测波长为277 nm;柱温为25  。
　　1.2.2 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱2.5 mg，置于25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀，得到对照品贮存液(100 g/mL)。分别吸取盐酸小檗碱对照品贮存液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，置于5 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，分别得到10、20、30、40、50、60 g/mL 的对照品工作溶液。1.2.3 黄连水提液的制备称取黄连0.1 g，加入蒸馏水100 mL，加热回流1.0 h，放冷，过滤，得到黄连水提样品溶液。
　　1.2.4 阴性样品溶液的制备吸取甲醇2 mL，过滤，得到阴性样品溶液。
　　2 结果
　　2.1 方法学考察
　　2.1.1 专属性试验精密吸取阴性样品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液和黄连水提样品溶液各10 L，自动进样注入高压液相色谱仪中，结果在盐酸小檗碱对照品色谱峰相应的位置上，黄连水提样品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而在阴性样品中未出现相应的色谱峰。
　　2.1.2 线性关系考察分别精密吸取浓度为10、20、30、40、50、60 g/mL 的盐酸小檗碱对照品溶液10 L，自动进样注入高压液相色谱仪，对色谱图进行处理后计算出峰面积，以盐酸小檗碱浓度(g/mL)为横坐标、峰面积值为纵坐标，计算回归方程为y=32 112x-2 634.3，R2=0.999 81。结果表明，在10-60 g/mL 范围内，峰面积与盐酸小檗碱浓度呈良好的线性关系。
　　2.1.3 精密度试验连续取盐酸小檗碱对照品溶液6 次，每次10 L 进样，结果峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.51%，说明仪器精密度良好。
　　2.1.4 重复性试验取同一批黄连水提液10 L，连续6 次，注入高压液相色谱仪，结果6 份样品峰面积RSD 为0.84%，表示方法重复性良好。
　　2.1.5 溶液稳定性试验分别于0、1、6、12、18 和24 h，取同一批黄连水提液样品10 L 进样，测定峰面积，结果显示，24 h 内峰面积RSD 为0.83%，表明样品溶液在24 h内稳定。
　　2.1.6 加样回收率试验取10 mL 盐酸小檗碱对照品贮存液，置25 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，制成浓度为40 g/mL 的盐酸小檗碱对照品溶液。分别量取40 g/mL对照品溶液6 份，每份2.5 mL，置5 mL 容量瓶中。再分别吸取已知盐酸小檗碱含量的黄连水提液2.5 mL，置对照品容量瓶中，用甲醇定容，至刻度，混匀。分别进样10 L注入高压液相色谱仪，计算加样回收率。结果6 份水提液样品平均回收率为98.15%，RSD 为1.87%，表明回收率良好。
　　2.2 样品含量测定
　　取10 L 黄连水提液，注入高压液相色谱仪，按照2.1的色谱条件进行检测，通过外标一点法计算黄连水提液中盐酸小檗碱的含量，结果样品中盐酸小檗碱含量为40.45 g/mL。
　　3 小结
　　本试验采用高效液相色谱-紫外检测法检测了黄连水提液中盐酸小檗碱的含量，方法学考察证明该试验中使用的方法良好，可以作为黄连水提液中盐酸小檗碱含量测定的方法。