谈士的宁和马钱子碱在大鼠体内的分布

　　士的宁和马钱子碱是一类七环骈合的吲哚生物碱，具有中枢兴奋、抗心律失常、抗血栓、镇痛、抗炎等药理作用，应用十分广泛。由于士的宁和马钱子碱治疗量与中毒量接近，近年来因马钱子药物中毒甚至死亡的报道屡有发生。目前有关同时使用士的宁和马钱子碱及其在生物体内代谢和分布等方面的研究较为少见，本研究旨在揭示士的宁和马钱子碱在动物体内分布的一般规律，为进一步阐明士的宁和马钱子碱的毒性机制及更好的合理使用这两种药物提供参考资料和依据。
　　1 实验材料
　　Agilent1100 高效液相色谱仪( 美国) ; LG15 - W 台式高速离心机( 北京) ; LD4 - 2 低速离心机( 北京) ; SARTORIOUSBS210S 万分之一电子分析天平( 美国) ; WH - 2 微型旋涡混合仪( 上海) ; SB - 2200 超声清洗器( 上海) 。士的宁、马钱子碱、盐酸普鲁卡因对照品( 中国药品生物制品检定所) ，甲醇为色谱纯( 美国Dikema 公司) ，其他试剂均为分析纯。雄性健康成年Wistar 大鼠36 只，250   290 g，购自四川大学华西实验动物中心。饲养环境: 恒温23   25  ，湿度50%   55 %，通风换气良好，光照合理，笼具和垫料卫生，喂营养颗粒饲料。
　　2 方法与结果
　　2. 1 实验分组
　　54 只大鼠随机分为3 组，即空白组、士的宁组和马钱子碱组，士的宁组和马钱子碱组每组按给药后处死时间( 10 min、30 min、2 h) 分为3 小组，各6 只。
　　2. 2 给药试液的配制
　　准确称取士的宁和马钱子碱对照品0. 05 g，分别用5 %羧甲基纤维素钠溶液溶解定容至25 ml，得浓度均为2. 0 mg/ml 的灌胃液。
　　2. 3 给药及样品采集
　　灌胃前，大鼠禁食12 h，自由饮水。称取体重，根据组别，按10 mg /kg 剂量分别灌服士的宁和马钱子碱的羧甲基纤维素钠溶液。灌胃10 min、30 min、2 h 后颈椎脱臼处死大鼠，迅速取出心、肝、脾、肺、肾、脑、胃和血液， 用0. 9%氯化钠注射液冲洗净表面血渍后滤纸吸干，研磨至糊状，准确称取各组织约( 0. 5 0. 05) g ( 脾脏组织因重量不足未按此标准称量) ，于- 20  冰箱中保存待检。
　　2. 4 样品测定
　　2. 4. 1 样品前处理
　　10 g /ml 盐酸普鲁卡因溶液( 内标) 30 l 于离心管中，挥干溶剂后加入血液0. 5 ml 或组织匀浆液0. 5 g，饱和氯化钠溶液0. 5 ml，混匀。加入氨水0. 5 ml，三氯甲烷6 ml涡旋振摇3 min，3500 r /min 离心8 min，下层溶液于60  水浴下通空气流挥干，残渣用流动相100 l 溶解，1. 2 104 r /min高速离心5 min 后，取20 l 上清液进样分析。
　　2. 4. 2 HPLC 分析
　　色谱柱: Welchrom C18 柱( 250 mm 4. 6 mm，5m) ，同样填料的短柱为预柱; 流动相: 甲醇- 0. 02%三乙胺( 用冰醋酸调至pH 8. 0) ( 55: 45) ; 流速: 1 ml /min; 检测波长:254 nm，同时用DAD 检测器采集紫外全光谱; 柱温: 25  ;进样量: 20 l。分别配制一系列梯度浓度的血液及组织添加样品。
　　2. 4. 1 及2. 4. 2 方法处理，进样分析，分别记录士的宁、马钱子碱和内标普鲁卡因的峰面积，以士的宁或马钱子碱与内标峰面积之比y 对样品中添加药物浓度x ( g /ml 或g /g)作线性回归，建立空白大鼠各组织的工作曲线。将处理组大鼠中所测得的士的宁和马钱子碱与内标峰面积之比代入所建工作曲线，得到士的宁和马钱子碱的浓度2. 5 不同组织脏器中士的宁和马钱子碱含量的结果比较士的宁和马钱子碱在大鼠各组织器官中均有分布。士的宁在各组织中浓度高低依次为肾、肝、心、脾、肺、脑、胃和血液; 马钱子碱在各组织中浓度高低依次为肝、肾、脾、心、肺、脑、胃和血液。组织分布浓度较高的为肝和肾，而血液中士的宁和马钱子碱浓度几乎都低于其他所考察的组织器官。
　　3 讨论
　　3. 1 给药方式以及大鼠处死时间的确定
　　士的宁和马钱子碱主要经口进入体内，本实验采用灌胃方式给药。由于士的宁和马钱子碱脂溶性较高，不易溶于水，易溶于有机溶剂，实验中将士的宁和马钱子碱分别溶于5 羧甲基纤维素钠溶液，用于大鼠灌胃。根据本实验前期对大鼠体内分布情况的研究及文献报道，选择了在士的宁、马钱子碱的吸收相、分布相、消除相各一个时间点处死大鼠，分别为给药后10 min，30 min 和2 h。
　　3. 2 士的宁和马钱子碱在大鼠体内的分布
　　实验结果显示，士的宁和马钱子碱在大鼠体内分布广泛，被测各组织器官中的药物含量均高于血浆。这与士的宁和马钱子碱的脂溶性较高有关。肝、肾中含量最高，蓄积明显，这与肝、肾是主要的代谢器官有关。士的宁和马钱子碱及其代谢物在生物体内的蓄积对这些组织脏器有无损伤及其损伤机制，还有待进一步研究。在脑组织中检出士的宁和马钱子碱，说明两者能穿透血脑屏障，进入中枢神经系统发挥兴奋作用。随着时间的变化，各组织中士的宁和马钱子碱的含量呈动态分布，10 min 时药物含量较低，30 min 时药物浓度达峰值，2 h 后浓度明显下降，表明士的宁和马钱子碱在大鼠体内分布、消除快速。
　　本实验结果与文献报道基本一致，结果提示在马钱子生物碱中毒的案件中，可以采集肝、肾等含量较高的组织作为检材，这对法医毒物分析具有重要作用。