超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的影响因素研究

　　超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的影响因素研究
　　摘要：采用超声波辅助法提取了凤尾草中的黄酮类化合物，研究了影响凤尾草黄酮类化合物提取的多种因素。试验结果表明，在提取温度为，提取时间为且用60（体积分数，下同）甲醇作为提取剂时提取率最高。关键词：凤尾草；黄酮类化合物；影响因素凤尾草，又称鸡爪草，属凤尾蕨科的小型陆生蕨，叶二型；不育叶为一回羽状复叶，羽片条形，上部羽片基部下延，在中轴两侧形成狭翅，下部羽片常有二至三叉，形似凤尾，故而得名。凤尾草中全草含黄酮类、甾醇、氨基酸、内酯或酯类等生理活性成分，全草都可以供药用，它具有清热利湿、凉血解毒、强筋活络等功效，能增强免疫力、延缓衰老等，无论在临床应用还是保健类食品开发方面都有广阔的开发前景。因此对凤尾草的研究和开发成为国内外目前的研究热点之一。本试验从凤尾草黄酮类化合物提取影响因素方面进行了研究，为凤尾草的深入研究和天然药物的开发提供了一定的理论依据。材料与方法材料凤尾草：采摘于江苏省宿迁学院院内墙角下。主要试剂和仪器0。01molL盐酸、60甲醇、60（体积分数，下同）乙醇、60（体积分数，下同）丙酮，均为分析纯，纯品由国药集团化学试剂有限公司（上海）生产；芦丁标准品，由中国药品生物制品检定所提供。型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；型超声波清洗器；温控水浴锅；大孔吸附树脂。方法黄酮类化合物的提取称取。00凤尾草样品，研磨破碎后，用60甲醇按（，）的比例混合均匀，于下提取60min后，在的水浴中超声波辅助提取次，每次，抽滤。收集到的滤液于下减压浓缩得到红色黏稠的粗提液，经树脂纯化、洗脱后，再次进行减压浓缩即得到黄酮类化合物浓缩液，将浓缩液用0。01molL盐酸和甲醇配成值为的备用液，摇匀供分析试验用。黄酮类化合物含量的测定芦丁标准储备液：称取芦丁标准品，置于的容量瓶中，加0。01molL盐酸和甲醇使其溶解7，8，调节值为并稀释至刻度，摇匀备用。分别移取、、、、、的芦丁标准储备液，于容量瓶中，定容。在波长处分别测定其吸光度，结果见图。准确吸取待测凤尾草的提取液定容至。在波长处测其吸光度。由标准曲线回归方程计算出凤尾草中黄酮类化合物的浓度，根据稀释倍数计算出凤尾草中黄酮类化合物的总含量9，10。结果与分析凤尾草黄酮类化合物的光谱特性由吸收光谱图可知，凤尾草黄酮类化合物在之间有一最大吸收峰，该最大吸收峰峰值出现在处。由于凤尾草黄酮类化合物对酸度很敏感，不同酸度会导致其最大吸收峰的移动1，因此以下各试验要在相同的条件下，选择其对应的最大吸收峰进行测定。提取剂对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响称取份的凤尾草样品，分别以60甲醇、60乙醇、60丙酮为提取剂定容至，其中加入0。01molL盐酸调节值为。按上述凤尾草提取剂的制取方法提取凤尾草液。各取测其吸光度，计算提取率。不同提取剂对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响见表。表表明，采用60甲醇作为提取剂，其提取效果均与60乙醇、60丙酮作为提取剂差异显著，采用甲醇为提取剂提取率最高。因此，选择60甲醇作为提取剂。提取温度对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响称取份样品研磨后，分别以60甲醇为溶剂定容至，其中加入0。01molL盐酸调节值为，于下提取60min后，再分别在、、、、、水浴中超声波辅助提取3次，每次，合并滤液，得凤尾草提取液。测定并计算提取率。不同提取温度对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响见图。由图可见，黄酮类化合物的提取率随提取温度的升高总体呈下降趋势，但以提取温度为时最高。另在试验中观察到，当提取温度分别为和时，凤尾草提取液中出现白色絮状沉淀，且甲醇的沸点为，在提取温度为时甲醇会大量挥发。分析结果表明，、、处理间差异不显著，而、处理与、、处理差异显著。故选择提取温度为。提取时间对黄酮类化合物提取率的影响称取份样品，都以60丙酮为提取剂定容至，其中加入0。01molL盐酸调节值为，40分别提取、、、。各取测其吸光度，计算提取率。由表可见，随提取时间的增加，黄酮类化合物的提取率呈先增大后减小的趋势，其中提取时间约为时提取率最大。据报道，超声波可缩短提取时间，提高提取率，但其在一定频率和功率下也可使有机大分子降解。可以推断，在频率时过长时间的超声波处理将导致黄酮类化合物的分解。因此，确定提取时间约为。样品分析精密称取凤尾草鲜草，按前述方法制备样品溶液，在波长处测其吸光度，分析结果凤尾草中黄酮类化合物的含量为。结论通过试验得知，超声波辅助提取凤尾草中的黄酮类化合物的最佳条件为：60甲醇为提取剂、值为的酸性条件、提取时间为、提取温度为、超声次数为次、每次1。凤尾草中含有丰富的黄酮类化合物，用超声波辅助提取时间短，原料利用率高，是一种值得采用的方法。参考文献：刘清飞，秦明珠凤尾草的形态组织学研究中药材，（）：国家中医药管理局《中华本草》编委会中华本草上海：上海科学技术出版社，余有贵，赵良忠，段林东，等凤尾草抗菌药物的提取与开发研究邵阳高等专科学校学报，（）：。胡浩斌，郑旭东青蕨根化学成分的研究天然产物研究与开发，，（）：程存归，毛姣艳三种蕨www。LWlm。Com类植物挥发油的化学成分研究林产化学与工业，（）：吴英华，马廷升，蔡小华，等凤尾草中总黄酮的提取工艺研究怀化医专学报，，（）：余俊，陈晓青，蒋新宇，等凤尾草中总黄酮的提取工艺研究中成药，，（）：张雁葛根保健饮料中黄酮类化合物稳定性的初步研究华南师范大学学报（自然科学版），（）：相宇，李友宾，张健，等猪毛菜化学成分研究中国中药杂志，，（）：B，D，（，），，（）：向道丽酶法提取越桔果渣花色苷酶解条件的研究中国林副特产，，（）：岳辉吉，朱杰天然色素的超声提取研究现代生物医学进展，，（）：