HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸咖啡酸的含量

　　川芎（RhizomaChuanxiong）为伞形科植物川芎（LigusticumchuanxiongHort。）的干燥根茎，其所含主要有效成分有酚酸类、内酯类、生物碱和挥发油等，广泛应用于临床治疗。目前，对川芎中成分的含量测定多集中在阿魏酸、藁本内酯和川芎嗪等的测定。本研究将川芎药材中阿魏酸和咖啡酸两组分含量同时测定，并对不同产地的药材进行含量比较，以完善川芎的质量控制。
　　1试剂与方法
　　1。1仪器
　　Agilent1100型高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器（DAD）、四元梯度泵、在线真空脱气机和柱温箱。超声波清洗器（DS3120DC），RE52型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
　　1。2试剂
　　甲醇为色谱级，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
　　1。3试验用药
　　阿魏酸、咖啡酸对照品（自制，经HPLC检测质量分数均99。0）。川芎购自四川等10产地，经鉴定均为正品。
　　1。4方法
　　1。4。1溶液制备
　　1。4。1。1对照品储备液的制备分别取阿魏酸和咖啡酸对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度分别为0。5008mgmL和1。000mgmL的对照品溶液。
　　1。4。1。2供试品溶液的制备选取不同产地的川芎药材，粉碎过筛后，分别精密称定粉末约1。0g，置锥形瓶中，然后加入0。5molLNaOH溶液50mL，超声提取20min，共提取3次，冷却，静置，离心，取上清液，用稀HCl调pH2，然后用乙酸乙酯等量萃取3次，合并萃取液，使用旋转蒸发仪蒸干，用甲醇复溶并稀释至25mL量瓶中，0。45m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
　　1。4。2色谱条件色谱柱：KromasilODS（250mm4。6mm，5流动相：甲醇0。5醋酸水（35：65）；检测波长：320nm；流速：1。0mLmin；进样量：10柱温：30。
　　2结果
　　2。1系统适用性试验
　　按照上述样品处理方法和色谱条件进行测定，两峰之间的分离度大于1。5；理论塔板数大于30000；拖尾因子在0。951。05之间，均满足定量要求。
　　2。2线性关系的考察
　　分别精密量取阿魏酸和咖啡酸对照品溶液适量，配成混合对照品系列溶液，按照上述色谱条件，进样分析，以各自的浓度X（gmL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到阿魏酸和咖啡酸回归方程分别为：Y5。339104X230。8，r0。9996；Y4。588104X470。2，r0。9995。线性范围分别为：13。6257。40gmL和29。40515。7gmL。
　　2。3精密度试验
　　取阿魏酸和咖啡酸的中浓度混合对照品溶液，按照1。4。2色谱条件，连续进样6次。分别测得阿魏酸和咖啡酸的峰面积，计算两组分峰面积的RSD分别为0。3和0。5，精密度良好。
　　2。4重复性试验
　　取6份同一产地川芎药材粉末，精密称定，按照1。4。1项下处理，按1。4。2色谱条件，进样分析。阿魏酸和咖啡酸含量的RSD分别为0。2和0。2。
　　3讨论
　　3。1提取条件的优化
　　本实验通过考察不同酚酸类成分的提取方法，比较了甲醇、甲醇水、甲醇5甲酸水、0。5molLNaOH溶液这4种不同的提取溶剂，氯仿、乙酸乙酯等2种不同的萃取溶液，对样品进行提取分析后进样分析，通过考察阿魏酸和咖啡酸的含量，从而选择了最佳的提取条件。
　　3。2色谱条件的优化
　　本实验考察了3根不同的色谱柱，分别为WatersC18（150mm3。9mm，4VenusilXBPC18（L）（250mm4。6mm，5m）和KromasilODS（250mm4。6mm，5m），综合考虑选择Kromasil色谱柱。参考药典选择检测波长为320nm，此波长可避免杂质干扰且可较好的检测该两组分。
　　川芎道地药材的形成模式为道地产区独特的生态环境与先进的栽培种植技术相结合的双因素关联决定型，川芎有效成分之间、土壤营养值之间均存在一定的相关关系，不同产地药材质量差别巨大。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作为川芎质量的评价指标。本研究采用HPLC法分析不同产地的川芎样品，结果表明各产地药材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明显差别，最大可相差2倍，与其他文献研究一致。对不同产地的川芎进行质量评价，可以完善川芎的质控体系，具有重要意义。