高效液相色谱法测定保元胶囊中丹酚酸B的含量

　　保元胶囊Ⅰ原标准收载于苏制字所附质量标准，由熟附片、肉桂、仙灵脾、熟地、丹参、川芎、红参、大黄酚8种组分。其功能主治为温阳补肾、活血泄浊。用于慢性肾衰竭属阳虚型及血透，患者减少血透次数。笔者通过高效液相色谱法法测定保元胶囊Ⅰ中的丹酚酸B的含量，完善了和提高了该制剂质量标准。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　安捷伦(Agilent 1100)高效液相色谱仪，G1314A VWD检测器(美国安捷伦公司);SK250LH超声波清洗器上海科导超声仪器有限公司);BP211D型电子天平(赛多利士)。
　　1.2 试药
　　丹 酚 酸 B 对 照 品 ( 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所111562-201009);甲醇、乙腈均为色谱纯;其余为分析纯;水为纯化水;保元胶囊Ⅰ(镇江市XXX医院，批号：111103，100403，101222。)
　　2 方法学考察
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱：Angilent C18柱(250mm 4.6 mm，5流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水 (30:10:1:59);流速：1.0ml/min;柱温:30 ;进样量:10检测波长 286nm;理论塔板数为 6647。
　　2.2 溶液制备
　　2.2.1 对照品溶液的制备
　　精密称取丹酚酸B对照品10.28mg置100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀，制成对照品储备液(每1ml含丹酚酸B 102.80g)。再精密量取对照品储备液3ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹酚酸B对照品溶液(每1ml含丹酚酸B 30.84g)。
　　2.2.2 样品溶液的制备
　　取本品10粒内容物，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入75%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.3 方法学考察
　　2.3.1 专属性考察
　　按标准处方量及制法制得不含丹参的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各10l，进样测定，阴性对照溶液在与对照品溶液色谱峰相应位置上无色谱峰出现，表明阴性对照溶液对测定结果无干扰，方法专属性良好。
　　2.3.2 线性关系 精密量取丹酚酸B对照品储备液(102.80gml-1)1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml 分别于 10ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进样分析，以峰面积(A)为纵坐标，相应浓度(C)为横坐标进行线性回归，绘制标准曲线,得回归方程为A=10.3125C-0.2602(R=0.9999)，线性范围10.28 61.68gmL-1，结果表明峰面积与浓度呈良好的线性关系。
　　2.3.3 稳定性试验
　　在本试验条件下，样品溶液室温放置10h，每隔2h时进样10l，记录峰面积，RSD为0.9%。表明供试品溶液10h内稳定。
　　2.3.4 精密度试验
　　取同一对照品溶液，依法操作，连续进样5次，每次10l。结果丹酚酸B对照品峰面积的RSD为0.5%(n=5)，表明精密度良好。
　　2.3.5 重复性试验
　　取本品1批，照样品测定法测定5份，测定丹酚酸B的含量，其平均含量为0.62 mg/粒，RS为0.2%。
　　2.3.6 加样回收率试验
　　取6份已知含量的样品(批号为111103)，精密称取, 置具塞的锥形瓶中，精密加入丹酚酸B对照品适量(每个浓度各2份)，依次加入6份样品中，按供试品溶液制备方法制备溶液，进样测定，计算回收率。
　　3 结论
　　3.1 供试品溶液制备方法中，我们对比了不同溶媒不同的提取方法进行了比较，发现超声提取时，计算结果含量偏低，表明提取不完全;75%乙醇回流提取方法较理想。测定结果表明上述方法提取完全，杂质较少。
　　3.2 采用 HPLC 法测定保元胶囊Ⅰ中的丹酚酸 B 的含量，该方法简便、准确、重复性好，不同批次的保元胶囊Ⅰ测定结果表明，丹酚酸B含量稳定，该方法可用于保元胶囊Ⅰ的含量测定。