HPLC法测定益肾胶囊中马钱苷的含量

　　益肾胶囊原标准收载于苏药制Z04002040所附质量标准，由知母、萸肉、丹参、黄柏、生地、白花蛇舌草等14味中药制成。功能主治：解毒活血、滋阴清热。用途：用于肾炎、肾病综合症属阴虚内热型，拮抗激素引起的阴虚内热等症。萸肉实为山茱萸科植物，山茱萸(Cornus officinalisSieb.et Zuce)的成熟果肉(干燥)，其有效成分为马钱苷。通过高效液相色谱法测定益肾胶囊中萸肉成分的含量，提高了该制剂质量标准，该方法较简便、快捷，稳定性及重现性好。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　安捷伦 1260 高效液相色谱仪，G1314B VWD 检测器(美国Agilent公司);METTLEDO TOLEDO电子天平(梅特勒);紫分光光度计(日本岛津)。
　　1.2 试药
　　氧化二磷减压干燥12小时后使用;乙腈为色谱纯;水为纯化水;益肾胶囊(镇江市丹徒区中医院;批号：140218，130122，130516)
　　2 实验方法
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱：安捷伦 C18柱(150 mm4.6 mm,5 m)，流动相：乙 腈 水 (14:86)，检 测 波 长 238nm，柱 温:30  ，流 速 ：1.0mL/min，进样量:10l，理论塔板数 4168。
　　2.2 溶液的制备
　　称取马钱苷对照品 10.42mg，置 100ml 容量瓶中，加80%甲醇振摇使其溶解，加 80%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成对照品贮备溶液(每1ml溶液中含马钱苷103.37g)。再精密量取储备溶液2ml，置10ml容量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。取本品10粒内容物，精密称定，4.2752g，混均，研细，称取供试品1.0232g，置20ml容量瓶中，加80%甲醇约15ml，超声处理(功率250W，频率40KHZ)30分钟，放冷，用 80%甲醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.3 标准曲线
　　精密量取马钱苷对照品贮备液0.5 ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml 分别置于 10ml 容量瓶中，加 80%甲醇稀释定容至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进样分析，以浓度(x)为横坐标，相应峰面积(y)为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程为 y=10.336x-0.00342(R=0.9999)，线性范围5.17 51.68g/ml，结果表明线性关系良好。
　　2.4 重复性
　　精密称取批号为140218样品6份，按照样品含量测定项下方法测定，测得结果，计算出马钱苷的量，其平均含量为0.12mg/粒，RSD为0.5%。
　　2.5 精密度测定
　　取马钱苷对照品溶液，进样6次，每次10l，记录峰面积，其相对平均偏差(RSD)为0.8%。
　　2.6 稳定性
　　取供试品溶液适量，室温放置12小时，在本试验条件下，每隔2小时间隔，进样10l，记录峰面积，计算结果，RSD为0.9%。结果表明该方法稳定性好，供试品溶液12小时内较稳定。
　　2.7 回收率
　　取6份已知含量的益肾胶囊样品(批号为140218)，精密称取本品内容物0.5g，分别置于20ml的容量瓶中,依次精密加入马钱苷对照品贮备液 1ml，1ml，1.5ml，1.5ml，1.8ml,1.8ml，照样品溶液的制备，并进行测定马钱苷的量，平均回收率为99.88%, RSD为0.4%。
　　2.8 阴性试验
　　按照处方配比称取除萸肉以外的其它成分，按照制备工艺制成阴性溶液，并照样品测定法测定，在主组分出峰处无干扰。
　　2.9 样品测定
　　取对照品溶液和样品溶液，各进样10l，按照上述测定法测定，读取峰面积值，计算结果。
　　3 讨论
　　3.1 在供试品溶液制备方法中，我们对比了超声提取、回流提取、索氏提取等方法，结果表明超声提取完全;对提取时间的考察，分别考察了20分钟、30分钟、40分钟、60分钟，超声提取时间比较表明30分钟、40分钟和60分钟的提取效率一样，而20分钟提取不完全，因此本试验确定超声提取时间为30分钟。
　　3.2 本方法简便、快捷、分离度好，测定结果科学、公正、准确、可靠，可作为该制剂质量控制指标之一。