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科研助攻丨重组蛋白,看这篇就够了!MecChemExpress

  Part 1:产品选择
  :我要买 Human EGF 用于体外细胞培养,网上一查,好多种相似产品,我该如何选择?
  :重组蛋白选择,有几个重点选择标准,我给你们列出来了!
  图 1. 重组蛋白表达步骤
  选择因素 1:研究目的
  在选择产品前,明确实验目的,可排除一些干扰因素。
  图 2. 重组蛋白表达体系的选择和对比
  选择因素 2:产品特性
  活性数据 (Biological Activity)
  ED50 半数有效量 (Median effective dose, ED50) 在量反应中指能引起 50% 最大反应强度的药量,在质反应中指引起 50% 实验对象出现阳性反应时的药量。一般是通过其在标准化条件下对特定细胞类型的影响 (例如刺激细胞增殖) 来测量的。
  小贴士:如何将 ED50 转换为比活力单位?
  : 如下图中,通过Human EGF 剂量依赖性刺激小鼠 BALB/c 3T3细胞增殖,ED50 <0.2 ng/mL。
  一个活性单位是每毫升具有最大响应作用 50% 的细胞因子的数量:
  Human EGF 1 个 unit (1U) 就是 0.2 ng/mL,每 1 mg 的 Human EGF 的活力值 (unit) 为:
  即 Human EGF 的比活力为 5.0   106 units/mg。
  计算当然也是有捷径的:
  进入公众号 "MCE 抑制剂" - 重组蛋白复溶计算器 - 比活力计算器
  Part 2:老生常谈—重组蛋白复溶及保存
  :由于工艺原因,蛋白冻干粉产品会呈现粉末状或肉眼不易观察到的透明薄膜状、胶冻状、雪花状,这些都是正常现象。冻干的体积大小也会受冻干前缓冲液组分、盐离子浓度、产品浓度等影响。此外,在运输过程中,冻干颗粒可能会分散,并粘附于瓶壁和瓶盖。
  MCE 保证每管产品的蛋白总量达到标示含量。说到这里,讲讲怎么更好地溶解重组蛋白吧~
  第一步:开盖前需离心
  在开盖使用之前,需先离心,将冻干粉收集于管底。实验操作: 10,000-12,000 rpm 离心 30 s,若没有高速离心机,3000-3500 rpm,离心 5 mins。
  第二步:产品复溶
  还是以 Human EGF 为案例;10 μg 规格溶解
  敲黑板:无论长期实验还是短期实验,溶解的浓度不低于 100 μg/mL!!
  短期实验:使用复溶 Buffer 直接溶解的重组蛋白,液体可在 2-8  最长保存 1 周。对于周期较短的实验 (不超过 7 天),可以直接取该条件下保存的细胞因子或者重组蛋白溶液加入到培养体系内即可,一周之内用完。(复溶 Buffer: 可参考 重组蛋白使用指南 里建议的溶液或者使用已贴心搭配好的蛋白伴侣)   长期实验:以下步骤供参考:1、先加 20-30 μL 建议复溶液
  2、再加 70-80 μL 含载体蛋白 (0.1% BSA, 5% HAS, 10% FBS, 或 5% 海藻糖) 的缓冲液/培养基
  3、分装大于 20 μL/管
  第三步:产品保存
  用复溶 Buffer 重悬的蛋白溶液用含载体蛋白 (0.1% BSA, 5% HAS, 10% FBS, 5% 海藻糖) 的溶液稀释后,-20  可保存至少三个月。
  Part 3:产品细节篇
  :以下一些小细节也要注意。
  1、溶解过程中不要采用涡旋震荡辅助溶解
  上期给大家说到:化合物的溶解可以借助水浴、超声、涡旋、震荡等方法助溶。但对于重组蛋白来说,具备一定的空间结构会使其活性更佳。
  正确操作:移液器枪头轻轻吹打混匀或者上下颠倒混匀。若无法做到充分溶解,可以将复溶产品至于水平摇床低速摇一段时间或 4  静置 2 h 以上。
  2、稀释用的含载体蛋白的溶液选择
  特别注意的是,稀释用的含载体蛋白的溶液是指有一定缓冲能力、pH 值为中性的溶液,如 PBS、培养液 DMEM 或者 RPMI1640 等。不可直接用水来代替。
  3、不同重组蛋白之间是否可以交叉使用? 重组蛋白的种属交叉活性需要根据具体产品而定;建议尽量选择对应种属。如实在无法匹配种属: a . 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效 (仅少数例外)。b. 干扰素,GM-CSF,IL-3,IL-4 具有种属特异性,例如重组人的这些细胞因子只能作用于人细胞,对小鼠和大鼠等其他种属无效果。 c. 成纤维细胞生长因子 (FGFs)、神经营养素 (Neurotrophins,如 BDNGF/GDNF/CNTF/β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守,各种属间交叉活性强。d. 同源交叉性的比对:打开蛋白数据库网站 Uniport,进行数据比对。 以上信息仅供参考,毕竟文献是很好的老师 。
  4、有些蛋白带了标签,有什么作用?
  重组蛋白的融合标签是在目的蛋白 N 端或 C 端进行融合表达的特定蛋白、多肽或寡肽标签。常用的标签有 His、GST、MBP、Trx、TF、MBP、Nus、SUMO、Flag 和 Fc 等。

秦岭禁地有多恐怖?中华龙脊鳌太线,为何禁止游客穿越?有着中华龙脊美称的鳌太线,为何被官方列为游人禁区?你可能不知道,在秦岭之上太白山与鳌山之间有这样一条路线,它只有短短170公里,却被誉为我国最难徒步穿越的5条路之一。它既被列为中华我很喜欢开着探岳车出去玩我们在老城中心漫步,紧凑的街巷时时传来商贩的叫卖,琳琅满目的小商品临街摆放,小吃摊位令人垂涎欲滴的海鲜料理这样的场景在我们在老城中心漫步,紧凑的街巷时时传来商贩的叫卖,琳琅满目的小50岁后关节炎高峰期,日常做到4多2少,或能预防关节炎关节炎是一种在每个年龄都可能会患上的疾病,一旦患上的话,会令人备受困扰。因此早期要时刻注意自己的关节健康,维护好自己的关节,关节炎的患者也可以从日常饮食入手,避免关节的不断退化。常耳鸣不停头晕目眩?送你2味药,调脾虚,滋肾阴,耳鸣消为什么人会耳鸣耳聋呢?究其原因,主要还是肾气亏虚和脾胃失调这两个原因!先来说肾虚为什么会导致耳鸣?首先,肾阴不足,则髓海失充,故头晕耳鸣。其次,中医上常说肾开窍于耳,肾气流经耳,肾冬补吃它,生吃护肝润肺熟吃养胃通便寒冷冬日,大家本就吃肉偏多,再加上不少人冬补也是以肉为主,当身体被肥鱼大肉狂轰滥炸后,难免会出现一些不适。俗话说春生夏长,秋收冬藏。随着冬季进一步降温,身体进补也进入了黄金期,我们今年流行复古风烫发,分享十款时髦又洋气的卷发,谁烫都高级有钱没钱烫头过年,每到年底或春节临近的这段时间,一些精明的女人已经开始为过年准备烫发的发型了。她们知道,现在烫发有两个优点,一是这个时间段烫发人少不拥挤,理发师更用心操作二是烫卷的ampampquot一白遮百丑ampampquot?关于美白的4大技巧,你可能还不知道俗话说一白遮百丑,这句话可以看出来白是多么的重要,并且大部分的女生都想拥有白皙的皮肤,但是很多人由于遗传或者是后天所致的原因,让自己很苦恼,今天就给大家分享4种变白的方法吧!1。做下次谁说干皮不会长痘?拉出来让我好好看看你是不是都觉得脸上长痘这件事,是油性肌肤才会有的事?不不不!那你就大错特错了!干皮的脸上偶尔也是会爆出几颗痘痘来的,干皮为什么还会长痘?你一定很好奇对不对?大部分的干性肌肤都拥有一个4消息!广厦大外实锤,江苏将摆烂,超外或入CBA,山东双外未归队目前广厦的外援消息终于获得了更新,那就是琼斯出现在了杭州,这也意味着基本上已经实锤了。毕竟如果不加盟广厦的话,那么他也不可能出现在杭州,这对于广厦肯定是一大保障。第一阶段胡金秋就显免费90元游戏!圣诞大促全体打骨折亏的当裤子!大表哥2仅491。免费领价值90元游戏!e宝圣诞大促力度空前!e宝果然给力,如传闻中一样,本次圣诞大促第一天就送出经典作品续作莎木3,不知道大家是不是和我一样对后面的几款神秘游戏越来越期待了!不我国驱逐舰数量将达两位数,海盗游戏ATLAS主播打造精英舰队目前我国海军的造船速度完全可以用下饺子来形容3月份的时候迎来了拉萨舰,在4月23日海军节迎来了大连舰,在11月份的时候迎来了鞍山舰,一共加起来的话数量达到了8艘,而另一批052D和
江苏曾经辉煌的5款啤酒,喝过2种都是老江苏,你喝过几种?中国的啤酒市场,已经从从草莽时代到寡头竞争的时代。过去,每个省份城市都有各地特色的啤酒品牌,而如今大多数已经被收购,遍地都是华润雪花青岛啤酒燕京啤酒和哈尔滨啤酒。而在上个世纪90年江苏最出名的5大名菜,鲜香美味,每一道都是江苏人的心头爱江苏,自然景观与人文景观相互映衬,令无数人向往。游览古镇水乡,来感受那古色古香的人文气息去到千年古刹,虔诚祈祷,寄托了人们美好的期许来到那湖光山色间,体会大自然的美好。若是来到江苏老朋友真好老朋友真好图文汪丽江(湖北)因为一张罚单的传递,激起相关朋友年轻时的工作回忆。这不,在美好明媚的日子里,我们相聚了。郭滨开车,我们来到汤湖公园。这个公园是一个极具绿色生态文化内涵综西纸坊浪漫之约相约精致露营地,邂逅浪漫西纸坊春已结束,初夏将临,傍晚时分,暑气渐消,微风习习,电影音乐繁星,篝火美食烧烤,2022年5月20日5月21日,在西纸坊来一场浪漫之约。精致生活x浪漫之约说起露营,第一印象便是帐篷冒金代铜坐龙遇上文创5月16日,在黑龙江省博物馆,工作人员展示以铜坐龙为原型设计的中性笔。黑龙江省博物馆收藏的铜坐龙是金代早中期器物,出土于哈尔滨市阿城区金上京会宁府遗址,为国家一级文物,是黑龙江省博护眼一把手,更是学习好帮手有道智能学习灯初体验为了能给孩子营造良好的学习环境,最近这两年陆陆续续添置了不少学习相关类的产品,今天要跟大家分享的是一款来自网易有道的智能学习灯。作为家里面的第一台智能学习灯,有道智能学习灯的用户体太阳遭淘汰!基德完虐蒙蒂,首发全崩,双核全梦游,内线必须补强北京时间5月16号太阳和独行侠的比赛,这场比赛太阳的发挥确实拉胯,你要知道他们前三节一直都在打铁,半场也就27分。当这种命中率出来,太阳怎么可能赢球?最终太阳惨败独行侠,遭遇淘汰。G7惨败独行侠,太阳该如何面对满众期待的抢七大战被独行侠大比分完败,这是谁也没有想到的,半场落后30分,一度最高落后46分,进入第四节落后42分已经无力回天,全场比赛独行侠客场12390太阳。据统计,这是自19玻尔兹曼大脑是什么?宇宙的形成玻尔兹曼大脑的几率有多大爱因斯坦层质疑与宙运行规律至精妙不太,可能是自然形成。牛顿也曾表示,当科学发展到尽头的时候,你会发现神已经在那里等着我们几千年了。换句话说,科学家们怀疑宇宙的一切很有可能是被某种神戚薇怀二胎再添锤!孕肚疑曝光至少5个月,和老公跳舞狂欢气色好近日,女星戚薇在社交平台上晒出一组动态,和老公李承铉一起跳舞狂欢大秀恩爱,气色非常不错。网友吃狗粮的同时,也更加确信了网上传出的二胎怀孕传闻。视频中戚薇身穿西装,化着精致的妆容,表千滚水隔夜水电壶水,有毒且致癌?央视的一个实验告诉你答案水,是生命之源,人体一切的生命活动都离不开水。它不仅是人体内运送各种营养物质的载体,还直接参与人体的新陈代谢。一般而言,人每天喝水的量至少要与体内的水分消耗量相平衡,专家表示,一个