想象一下，如果我们身体里的细胞无法全部打乱成均匀分布会怎样？实际上，在那种情况下，基本已经只能算是一个巨型的多细胞团了，因为在生物体内，只有各种不同的细胞能够被精确的分选定位，才能形成一个具有多功能分区能够执行正常生理活动的生物有机体。类似的问题如果放到人工研究体系，也是殊途同归，比如近年来发展的液滴微流孔是一种强大的技术平台，可用于多种生物学应用，包括单细胞遗传学、抗体发现和定向进化，但要想筛选在化学组成上不同的液滴目前仍面临困难。可事实上，在化学成分不同的液滴中进行以细胞为基础的生物化学分析具有许多独特的优势，尤其是在减少样品量、成本以及提高产量等方面 。此外，根据所需特征对不同组分液滴进行分类的能力十分关键，特别是在分离生物或化学筛选的命中，如可溶性细胞产物如抗体的筛选以及药物的筛选等。因此，按需分选生产具有不同化学组成的液滴对基础和临床研究都具有重大意义 。 图1 液滴微流控技术。 【新方法&新平台】 近日，来自欧洲分子生物学实验室的Christoph A. Merten教授团队 设计了一种升级版的微流控技术平台（microfluidic Braille valve platform，简称Braille Display，BD），用于按需生成具有不同化学成分（16种不同试剂及其组合）的液滴，并且能根据荧光信号对具有不同化学性质的液滴进行分选 。该技术平台结构紧凑，功能多样，并且成本效益较高。在应用测试方面，这一新型微流控技术平台成功完成了针对74种情况筛选癌细胞药物敏感性的全过程，且能够根据酶活性对不同的液滴的分类。相关研究内容以＂A microfluidic Braille valve platform for on-demand production, combinatorial screening and sorting of chemically distinct droplets＂为题发表于《Nature Protocols》。 图2 微流控技术集成平台用于药物筛选和液滴分选。 【平台搭建】 首先就是设计芯片构造，在微流控芯片的常规基础上，BD平台采用64个针口以4 16的矩阵进行排列，并安装控制器用于驱动，打开和关闭上述芯片上的微流体阀。从而可以控制和混合16种注入溶液或在微流体流道中分选液滴 （每个分选通道仅使用4个针口）。整体建造流程，可以列为以下几点：微流体芯片模具制备 用于筛选或分选芯片制造的晶片制备 光致抗蚀剂的制备 掩模对准器设置和曝光 后烘烤 显影 环氧树脂模具 用于药物筛选或分选模块的PDMS芯片制备 芯片生产 定制BD控制器。其他有关制造BD控制器和模具测试的具体细节建议读者可以于官网的补充材料中获取。 图3 总体芯片以及组合控制生产示意图。 【系统配备】 将芯片平台建造好后，则需要定制设定灵活的软件控制系统，来实现多样的功能，充分发挥BD的强大性能。为了充分适配和发挥平台的多样功能，研究者共设计了12种应用程序用于实现不同的实验目的 ，例如应用程序A：药物筛选型，其中还包括数据分析的详细信息；以及应用程序B：液滴分选型，包括分选芯片的制备、实验设置和数据评估。该研究提出方法中所有的相关应用程序包均附于官网，可供下载进行适配使用 。 图4 分析方法的工作流程示意图。 【应用示例】 组合药物筛选 在进行组合药物筛选时，主要分为三个步骤：（i）药物和对照品的制备；（ii）编码（barcoding）;（iii）BD上的芯片对接。对于该研究设计的平台，体系优化后选择在每个样本约100个细胞的群体水平上进行分析，从而可以保障更多的细胞-细胞相互作用，提高药物反应 。然而，从细胞群体水平来看，只有最有效的药物或药物组合才能被识别，而单个耐药克隆可能无法分析到。因此，BD平台也被用于生成具有不同化学成分的单细胞液滴（每个受试药物约250个重复组），从而实现对单个耐药克隆的识别 。然而，想要尝试的读者们需要注意，单细胞液滴形式阻止了几乎所有类型的细胞-细胞相互作用，因而可能导致药物敏感性的改变，大家可以根据自己的具体应用和科学问题选择分析模式，或者是进行两种模式的混合筛选。 图4 分析方法的工作流程示意图。 液滴筛选 BD技术的另一个应用是其用于化学上不同的液滴进行分类筛选。该研究首先采用了基于荧光的条形编码策略，只要样品保持在连续微流阵列中，这些荧光编码策略就可用于明确标记所有的液滴 。此外，研究进一步通过在封装前用抗体对细胞进行染色来确定每个栓塞的相对细胞数，以提高微流体筛网的可靠性。所使用的抗体可以与生物酶偶联，该酶可以将安培红（Amplex Red）转化为试卤灵（resorufin），产生红色荧光达到对液滴的标记 。 研究通过试验成功实现了基于图像分析的液滴、细胞和果蝇胚胎分选。此外，该平台可以进一步实现多达八种方式的分选模式，与常规的二元荧光强度不同，八向排序可以实现更细微的差异研究 ，如通过将液滴收集到不同强度的＂箱＂中并进行下游分析，可以研究目标群体中的荧光强度梯度，因此，BD分选集成的平台不仅可以分析不同药物处理对样本的影响，还可以物理分离感兴趣的特定样本群进行下游分析（例如，成像和测序） 。 图6 根据酶活性对液滴进行分类。 【平台优势及应用总结】 综合效率和应用潜力进行分析，与现有的技术相比，该集成型BD微流控平台的主要优势则是成本低、灵活性高，可实现诸如联合药物筛选和个性化癌症治疗等不同的应用，也可以用于高效进行细胞、胚胎或液滴的多通道分选制备 。该技术的进一步优化包括提升微流速度已经降低整体成本，从而应用去其他更多的领域，如组合筛选用于触发细胞命运的最佳生长因子组合，可用于细胞分化、再生医或出生缺陷的预防和治疗等。此外，因为该平台根据自动图像分析分离样品进行特异性分析，有望在基于光学显微镜成像的发育生物学中获得相关应用。 文章来源： https://www.nature.com/articles/s41596-022-00740-4 入群交流 围绕再生医学，EFL建有相关社群，深入交流可私信小编~
玩游戏聒噪敷衍没分寸，还不会说话，别再硬凹团宠人设了在全民都在追奥运会的时候，也有不少人引起了争议，比如小S，比如鬼鬼吴映洁。起因是有网友发现鬼鬼的闺蜜在ins上祝贺夺冠的中国运动员，但是捧一踩一意思明显。而鬼鬼本人也在ins上祝贺陈小春小丑装VSJasper吃火龙果，场面太美，哈哈哈哈哈笑不活了近日，陈小春在综艺节目惊艳唱演算你狠，小丑妆容，重现小丑经典台阶舞，真的太可了，像极了吃火龙果的Jasper！陈小春和Jasper梦幻联动，哈哈哈，网友真的好细心，这相似度不是一般NBA晚报詹姆斯祝福陶乐西，篮网新秀一鸣惊人，霍华德被驱逐亲爱的小伙伴们假期快乐！经过了漫长的长草期，我们终于等来了新赛季的开始，今日NBA季前赛已经开打，篮网和湖人的首战以篮网大胜结束。明日有多场季前赛继续开打，勇士队晒出球员登机照为明坚果好吃又健康，吃多了担心吃成胖子？真相是，这反而有助于减肥坚果不仅好吃，而且被认为是世界上最健康的食物之一。过去几十年来，越来越多的研究证据支持食用坚果可以通过降低像糖尿病代谢综合征和心血管疾病等心脏代谢健康风险。因此，当前世界上主要的饮山东男篮双外援确定，4211大外援成功续约，继续搭档哈德森这个休赛期对于山东男篮来说可谓是多事之秋，先是球队传出欠薪丑闻，引起了球迷热议接着股权完成了变更，山东高速重新回归近日球队又走马换帅，主教练巩晓彬携杨文海等助教请辞离任，新帅徐长锁乐坛大姐大叶蒨文获亲友庆生，60岁满头白发，五官依旧立体本文编辑剧透社彤心晓筑未经授权严禁转载，发现抄袭者将进行全网投诉说起叶蒨文的名字，大家总能够记起她香港乐坛大姐大的地位，入行几十年来，能够有如今的成就属实不容易。现在的叶蒨文似乎更西甲西班牙人胜皇马来源新华网10月3日，西班牙人队球员武磊在比赛前热身。当日，在20212022赛季西班牙足球甲级联赛第八轮比赛中，西班牙人队主场以2比1战胜皇家马德里队。新华社发（胡安戈萨摄）10央视名嘴郑天亮嫁人坚决不找同行，却被鲁健一碗面汤虏获了有生之年，欣喜相逢，点击上方关注一起抒写更多温暖的故事。鲁健第一次跟郑天亮表白时，郑天亮就坚决告诉他自己不找同行，因为她觉得同行在一起麻烦，距离太近，没有神秘感。谁曾想她最后不仅找100元人民币，足够让越南美女为你做些什么？中国游客太便宜了100万元能让越南美女提供哪些服务？体验过的中国游客表示，太划算了。现如今国民越来越有资金出国游玩，而且国外的消费并不高，并且旅游资源丰富，每年到了五一国庆都有上百万的中国游客出国中国女排堪忧的重组计划，五位名帅拒绝接手，四大核心相继离队对于任何一支女排队伍来说，一名优秀的主帅往往能决定她们未来一段时间内取得怎样的成绩。就拿国内的女排队伍来说，阵容豪华的俱乐部同样有不少，但没有哪支队伍是因此而夺得了联赛的冠军。最具港普FA女神们为何只剩下陈法蓉孤身一人？在众多港星女神中，港普F4一直蔡少芬朱茵陈法蓉洪欣四位大美女，每每同框都是一道靓丽的风景线。四位姐妹花因为每个人都说着一口并不流利的港普话，所以就有了港普F4的称号，不过，几位姐姐