昆虫杆状病毒表达系统的经典案例分享

　　重组蛋白表达系列五
　　昆虫杆状病毒表达系统
　　展示案例：Baculovirus / Insect Cells expression system
　　昆虫细胞与哺乳动物细胞翻译和翻译后蛋白修饰的模式与能力相似，表达的重组蛋白与天然蛋白相似且具有完整的生物活性，细胞悬浮生长，容易实现大规模低成本生产；杆状病毒能容纳大分子的插入片段，易于表达异源多聚体蛋白。由于其不具有任何对哺乳动物有潜在致病性的动物病毒片段，昆虫杆状病毒表达系统问世以来，获得了人们的高度重视。
　　普健生物的杆状病毒-昆虫蛋白表达服务，采用经典的Bac-to-Bac表达体系，并加以改进。在表达方式（胞内或分泌）、信号肽选择、细胞培养方式及细胞选择（Sf9、Sf21、Hi5）等方面有着丰富的案例经验，表达成功率高达99.9%，同时可提供高达200 L的蛋白表达纯化服务。
　　案例展示
　　Project Information
　　Beta-glucosidase（后文简写为BetaGluc1）是纤维素分解酶系中的重要组成成分，能够水解结合于末端非还原性的β-D-葡萄糖键，同时释放出β-D-葡萄糖和相应的配基，参与生物糖代谢，对维持生物正常生理功能起重要作用。
　　BetaGluc1采用普健杆状病毒-昆虫表达系统成功可溶表达，产量高达234.2mg/L，纯度>95%，经检验活性较高。以图为鉴Test Report
　　01
　　Western Blot with ECL. Detection with anti-His antibodies.
　　BetaGluc1 protein have expressed in sf9 cells, and they have expressed in culture medium. BetaGluc1 clone 4 was picked to generate P2 virus and do MOI test.
　　02
　　According to the MOI test results, the best expression condition is: BetaGlu1: 150ul, Hi5, in culture medium.
　　03
　　Purification Test
　　200ml scale-up and purification using High 5 cells. Purification tests results of culture medium are illustrated below.
　　MW. Molecular weight marker. IN.Input. FT. Flow through. W. Washes. E.Eluted fractions.
　　04
　　Purification QC
　　Reducing-PAGE analysis. 2µg of sample loaded. 1.2 are BetaGlu1
　　05
　　Fermentation and Purification
　　1L scale up purification test
　　MW. Molecular weight marker. IN. Input. FT. Flow through. W. Washes. E. Eluted fractions.
　　06
　　Final QC
　　Reducing-PAGE analysis. 2µg of sample loaded. 1. 2 are BetaGlu1
　　昆虫杆状病毒表达主要包含这些流程及技术内容表达体系选择
　　多种表达载体：胞内表达和分泌表达载体系列
　　多种表达细胞：Sf9，Sf21，Hi-5
　　表达及纯化测试
　　高效率：优化表达方案，实验周期短；
　　P1代病毒生产及表达测试，P2代病毒生产及MOI测试。
　　大规模生产服务
　　可满足高达200 L的生产规模。
　　一站式服务
　　基因设计及优化、蛋白表达及纯化、后续加工处理、数据报告等。