浴冰重生来自一个标本的自白

　　传说，
　　凤凰是人世间幸福的使者。
　　每五百年，
　　它就要背负着
　　积累于人世间的所有不快和仇恨恩怨，
　　投身于熊熊烈火中自焚，
　　以生命的美丽终结
　　换取人世的祥和与幸福。
　　在肉体经受了巨大的痛苦和轮回后
　　它们才能以更美好的躯体重生。
　　然而，
　　我不是凤凰。
　　我只是一个标本。
　　我的主人正被痛苦的癌症折磨，
　　为了减轻她的疼痛，
　　我必须牺牲自己。
　　烈火，
　　或冰冻，
　　总要选择一种死的方式。
　　烈火让你灰飞烟灭，
　　冰冻却能让我活成永恒，
　　美其名曰＂重生＂。
　　然而
　　听医生说，
　　即使是冰冻，
　　死的方法也有很多种。
　　最快捷、简便的要数冰冻切片了，
　　它还可以用于手术中的快速病理诊断。
　　1
　　干脆一点的比如直接冰冻切片法多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片，如恒冷箱切片、甲醇制冷器制冷箱切片、二氧化碳冰冻法切片、半导体制冷冰冻切片等。
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　　如果标本很脆弱或者有树枝状突起（当切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失；如果间隙较多，还会因发生散乱而失去相互间的联系造成移位）则可以尝试 明胶冰冻切片法。
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　　或者选择冰冻切片粘片法三种中的任一种。
　　3.1 蛋白甘油粘片法
　　烘烤的温度不超过40 ，
　　待烤干后立即取出，
　　因为时间过久或温度过高切片都容易破碎。
　　烤干后用70%乙醇及蒸馏水洗后即可染色。
　　3.2 Lillie明胶粘片法
　　则是将切片放入1%明胶水溶液数分钟，
　　捞出置于载玻片上，
　　将多余液体倾去。
　　入环保组织固定液中
　　固定5 min,水洗10 min，即可染色。
　　3.3 乙醇明胶粘片法
　　则需将切片浸入
　　0.1%或0.75%明胶溶液
　　（以40%乙醇配制）
　　数分钟，
　　捞于载片上，
　　经室温短时干燥，
　　入氯仿1 min ，
　　经95%及70%乙醇洗去氯仿，
　　再经蒸馏水洗后染色。
　　他们又说
　　现在国内外有许多厂家
　　用高分子材料
　　配制成了冰冻切片包埋液，
　　可直接在切片机组织卡盘（chuck）上
　　加少许包埋液，
　　在其固化前将标本嵌入，
　　然后周围加入少许包埋液稳定。
　　常规切片厚度为2-100微米。
　　或者
　　在盛标本的包埋模具内，
　　挤出适量冰冻包埋液，
　　将标本放入后再加包埋剂完全淹没，
　　如有气泡则用针头或吸头吸出。
　　然后将装有标本和包埋液的模具，
　　正置于切片机冷室内冰冻10分钟，
　　至包埋液固化。
　　也可将模具置于液氮或-40 -70 度冰箱冰冻固化保存。
　　突然觉得，
　　原来死也是一件极其麻烦的事情。
　　正当我犹豫不决的时候，
　　很多已经重生的小伙伴，
　　走到我身边，
　　给我说了它们自己的故事。
　　原来
　　小A的出现是因为 在手术进行中，医生突然发现它主人的病变与原诊断和原定手术方案不相符合；
　　小B的使命是为了 了解淋巴结内是否有转移的淋巴细胞或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者采取其他的治疗措施；
　　小C需要帮一个恶性肿瘤患者了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织；
　　小D诞生于一个病人在做剖腹探查时发现的肿块；
　　小E给我展示了它身上的的脂肪和脂类物质，它们来源于脂肪瘤、肉瘤或某些科研组织等；
　　小F身上，有 一些酶，比如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。
　　小G身上特殊的染色效果，据说是用Eager氏法 和Marchi氏法获得的。
　　听完了大家的诉说，
　　我坚定了自己成为冰冻切片的决心，
　　便毫不犹豫地推开了白衣天使的门。
　　他们马上召集了
　　冰冻切片领域的专家，
　　召开了一个座谈会。
　　院长首先发话：
　　＂为了让顾客更好地了解我们要做的事，
　　现在请各部门负责人阐述一下手术过程。＂
　　＂第一步，是取材。＂
　　A:＂取材的时候我们会尽量保持刀具与台面的干燥，避免标本与水接触，即使标本中含有水或者血性液体，我们也会用干燥的纱布或者滤纸把水吸干，这样可以提高切片的质量从而防止空洞、冰晶等现象的出现。＂
　　B:＂由于脂肪组织不易于切片，我们在取材时会尽量去除。＂
　　C:＂取材时也会注意标本结构的完整性，会带有背膜、皮质、髓质或者内膜等结构。＂
　　D:＂此外，还会考虑标本结构的方向性以及标本切片的方向性，如肾标本的取材，标本的截面会包括肾背膜、肾皮质、肾髓质3种结构。若您没有立刻切片的要求，我们则可以先清理然后快速放入液氮保存。＂
　　A:＂取材后会对标本进行包埋、切片、固定等前期处理。＂
　　＂快速冷冻可以有效降低冰晶的形成。新鲜的组织要快速冷冻，一般情况下，较硬组织如子宫肌瘤要冷冻1-2分钟，软组织以及细胞丰富的组织如肝、脾和淋巴结等需要2-4分钟，脂肪组织需要5-6分钟，脂肪组织的切片厚度要达到8-10 um才更有利于观察。＂
　　＂现常用的冰冻包埋液是由高分子聚合物组成的透明粘稠液体，速冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因此能保证最佳的组织细胞形态，并具有支持填充、减少皱褶和断裂的作用，能切出2-3微米的超薄切片。这个您可以放心。＂
　　＂温度过低、过高会导致组织块过硬或者硬度不够，从而影响切片质量，产生搓板状、梯田状、厚薄不均、破碎及粉末状现象。根据不同组织的形态和组成成分的不同，未固定的组织合适的对应温度大致如下：乳腺、卵巢、子宫等：-20 ~-25 ；胃肠等：-18~-20 ；甲状腺、肝、肾、脾等：-15 左右；脂肪组织一般在-35 以下。固定好的组织合适的温度一般为-12~-17 。＂
　　＂切片时会提前将锋利的刀片调节合适的角度安在刀架上，会保证切片刀在适宜的温度下，以防止切片粘连。用力会均匀、柔和，也会防止污染及切片皱褶，尽量切到组织最大面，为了切到病理部位，必要时可能要连续切片，然后用刷子辅助展开切片，沾在载玻片上。片子沾好后，就立刻将它浸没于固定液中。固定液种类很多，常用的有冰丙酮、多聚甲醛、环保组织固定液等。如果组织固定延迟会出现风干的假象，当组织片粘在有温度的玻片上时就会出现明显的风干假象，表现为核的细节丢失及胞浆液的溢出。我想这一点您也需要了解并做好心理准备。＂
　　看着他们口若悬河胸有成竹的样子，
　　我顿时充满了信心。
　　会议结束后
　　主刀医生递给了我一份手术合同，
　　我从头到尾看了一遍，
　　发现合同的末尾明确写了
　　冰冻切片的常见问题及解决方案：
　　如下所示：
　　1 切片的厚度：
　　一般情况推荐切6um厚，这种厚度使染色更加饱满，层次清晰，6um的片子可以有更多的时间去避免风干假象，也会减少冰晶所造成的细胞核空洞。特殊情况下可能需要更厚或更薄的片子。
　　2 脱片现象：
　　脱片一般有以下几种情况：
　　（1）本身非常干燥或过度脱水的组织；
　　（2）组织片的周长与面积比过大，像细条形的组织容易受染色缸内液体涡旋应力的影响而脱落，同样包括薄的纤维囊肿及不规则的坏死组织，太厚的组织也不例外；
　　（3）少数情况需要使用100%的乙醇固定；
　　（4）一张玻片贴多个片子时，片子周围的包埋物相互重叠；
　　（5）组织内含过多的坏死组织，组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分溢出，坏死组织失去支撑作用，染色时容易脱落；
　　（6）固定液浓度过低；
　　（7）载玻片不干净。
　　3 冰晶的形成：
　　含水量特别多的组织冷冻时会出现肥皂泡样的空隙，主要是因为组织中的水分凝固时形成球形的冰晶，挤压纤维组织条而产生泡沫样的形状。组织片在进一步处理时泡沫样的水分又重新分布于间质，而未曾冷冻的组织显示出间质的水肿。这些水分巨多的组织在切片时很难保证不裂开，应尽可能提高切片的温度。
　　4 冰冻假象：
　　组织在冰冻时候的变化与水结冰膨胀是密切相关的，细胞实性的组织会受到冰泡膨胀的挤压，这在水肿组织非常明显。有些组织细胞浆内会出现一些空泡，也是冰冻假象的一种。
　　如此周全的考虑
　　已经完全消除了我的后顾之忧，
　　于是，
　　我愉快地签下了自己的名字。
　　静待重生。
　　……
　　手术很成功，
　　所以，
　　我又可以在这里和你们说话了。