技能PhD的日常怎样找一个适合的细胞分选方法？

　　猜想大家可能都有过这种经历：导师要求你在实验室建立一个新的实验方法。比如想找一个细胞分选的好方法，从人的全血里做 CD4 + T 细胞的基因功能研究。
　　看起来还挺简单的，但，市面上细胞分选的方法实在太多了，怎么选择呢……
　　方法有很多，最普遍的方法就是用特定抗体偶联磁珠来捕获细胞 。细胞与磁珠结合后，再利用磁分离器来分选。但具体选用何种方法，还是要看下游的研究。
　　如果目标是想在选出的 CD4 + T 细胞上做基因功能研究，因此不能采用会影响靶细胞基因表达或者会激活细胞的方法，还得获得大量高纯度、高活力的细胞。
　　阴选是做基因研究广为推荐的一种方法，间接的获得目的细胞。通常目的细胞上没有筛选标记。通过使用与所有非目的细胞结合的抗体混合物，将非目的细胞从样品中去除，就留下目的细胞了。
　　用磁分离器将无关细胞去除的这个方法其实不是很有效，因为一些没与抗体结合的细胞会被结合的细胞一起连带着选出去。因此，为了提高纯度，分选步骤得重复好几遍。所以阴选暂不考虑，因为最终要的细胞需要很纯且不能受分选影响…
　　因为细胞表面上有 CD4 标记，也许可以阳选。阳选是直接将目的细胞特异性分选出来，并且几乎不含非目的细胞。通常使用特定的抗体与磁珠偶联，结合目的细胞。
　　而在这种情况下，高亲和力抗体被标记在细胞上，会对许多下游研究产生影响。有时，结合在细胞上的抗体和磁珠可以被二抗的加入而移除。或者，结合物有的时候会自然而然的分离。但大部分情况下，磁珠被保留在目的细胞上，可能会对细胞造成机械压力 。
　　能不能有一个方法把阴选和阳选的优势都结合起来啊…
　　Mohr et al. (2018)， 提到了一个叫「Fab-TACS」的技术，作者直接从全血中通过免疫亲和层析来纯化淋巴细胞，新颖又高效。
　　这个方法是来自德国的一家叫 IBA Lifesciences 的公司，他们针对细胞分选有多种 kits，而且包含这里要做的 CD4 + T 细胞。这个会不会就是要找的呢？
　　经过搜查，Fab-TACS 技术是指 Fab-based Traceless Affinity Cell Selection，亲和无痕细胞分选。在 IBA 独家的 Twin-Strep-tag® / Strep-Tactin® 基础上，运用免疫亲和层析的原理，利用细胞表面抗原分子 CD marker 中的 Fab 片段，捕捉及释放目标细胞。能次次精准的从全血、小鼠脾脏和单细胞组织悬液中选出不带标签，未经激活的细胞。
　　原理很好理解。Fab-TACS 柱子填充有经 Strep-Tactin® 包被的细胞级琼脂糖基质，能与含有 Twin-Strep-tag 的 Fab 片段结合。
　　接着，将全血或是血液样本加入柱子，目的细胞就可以与 Fab 片段结合了，而非目的细胞被洗掉。
　　最后，加入生物素（biotin），因为 biotin 亲和力较高，会中断 Fab 片段与 Strep-Tactin® 的结合，此时 Fab 片段也同时脱离下来。Fab 片段因亲和力的降低，自发脱离细胞表面，无标记的目的细胞就到手啦！
　　四步操作，就可以直接从全血中分离细胞，这确实是非常简单了。而且不涉及到磁珠的使用，也不用制备 PBMC，因此实际上其实是可以省下很多时间的！
　　Fab-TACS 技术属于阳选，可以得到非常纯的 CD4 + 细胞，选出的细胞没有标记，细胞表面无高亲和力抗体或者磁珠。可以将帮助进行基因研究而而且不影响 CD4 + 细胞的基因表达。
　　总的来说，这个方法的优点就是高得率、高纯度和高活力。
　　分享这篇经验，希望可以帮助到在苦苦找方法，或者是同做细胞分选的实验汪们。
　　文章来源：IBA
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