甲状腺癌组织中EG1基因的表达与预后的相关研究

　　毕业论文 作者：朱见 田兴松 周文红 丛明华 陈悦之【关键词】  甲状腺肿瘤·癌基因·Endothelial derived gene 1·肿瘤标记,生物学·预后
　　【ABSTRACT】 Objective: To study the expression of EG-1 in thyroid cancer tissue and analyze its correlation with clinical prognosis. Methods: EG-1 mRNA levels in malignant thyroid tissues were evaluated by RT-PCR. All patients were followed up. The survival rates were analyze in EG-1 positive group and EG-1 negative group. Benign thyroid tissues were used as control. Results：EG-1 was expressed in thyroid cancer. The differences between expression of malignant thyroid tissues and benign thyroid tissues were statistically significant （P 0. 05）. In thyroid cancer, the survival rate differences between negative and positive groups of EG-1 had statistical significance （P 0.05）. EG-1 positive group was with bad prognosis. Conclusion: EG-1 was expressed in thyroid cancer and might be used as an important prognostic marker.
　　【KEY WORDS】 Thyroid neoplasms ·Oncogenes·Endothelial derived gene 1·Tumor markers, biological·Prognosis
　　Endothelial derived gene 1（EG-1）是Liu等［１］研究肿瘤条件液环境下和正常培养液环境下脐静脉内皮细胞基因表达差异时，通过抑制性消减杂交技术筛选出的明显表达的1种上调基因。该基因定位于4号染色体，编码1个由178个氨基酸组成，相对分子质量19.5 103的蛋白质。研究发现其与内皮、上皮细胞的增生激活状态密切相关，推测可能与恶性肿瘤的肿瘤血管形成有关［１］。实体瘤相关研究中证实在乳腺癌细胞、结直肠癌细胞及前列腺癌细胞中均有该基因过表达［２］。
　　目前在甲状腺癌方面，国内外尚未有EG-1的相关研究。本研究通过RT-PCR的方法，检测EG-1基因在甲状腺癌组织中表达情况，分析其表达和甲状腺癌的预后的关系，判断EG-1基因在评价甲状腺癌预后方面可能存在的价值。
　　1 资料和方法      考虑患者发病年龄和肿瘤大小对患者预后影响，参照Shaha 等［３］的研究结果，发病年龄以45岁为界，肿瘤大小以4 cm为界，将52例甲状腺癌患者分组。      使用AMES［６］, AGES［７］和MACIS［８］评分系统评价预后。AMES评分高危组23例，低危组29例；AGES评分以5为界，高危组（   5分）21例和低危组（<5分）31例；MACIS评分以7为界，高危组（ 7分）17例，低危组（<7分）35例。各评分系统行单因素生存分析。    1.2.1 RNA 提取 选用Ambion公司Paraffin Block RNA Isolation kit试剂盒，参照文献 ［９-１０］提取甲状腺组织中EG-1 mRNA，紫外可见光分光光度计测定含量。    1.2.3 结果判定 RT-PCR 后1.5%琼脂糖凝胶行电泳, 紫外可见光分光光度计检测EG-1扩增产物为246 bp的特异性条带。
　　1.3 统计学分析 采用SPSS 10.0统计分析软件，良恶性甲状腺组织中EG-1基因表达差异比较采用4格表资料的卡方检验，单因素生存分析应用Kaplan-Meier 生存曲线分布的时序检验，多因素生存分析应用Cox 比例风险回归模型。P 0.05为差异有统计学意义。
　　[NextPage]
　　2 结果    2.2 单因素生存分析 甲状腺癌患者EG-1基因表达组（38例）和未表达组（14例）总生存曲线分析存在差异，P=0.025（图2）。年龄、淋巴结转移、肿瘤分期、病理类型的不同组别间总生存曲线比较差异均有统计学意义，性别间总生存曲线比较差异无统计学意义（表1）。    2.4 评分系统评分与生存分析 对AMES、AGES 和MACIS的高危组与低危组生存曲线行单因素生存分析，P值分别为0.001,0.044和<0.001，差异均有统计学意义。
　　3 讨论
　　甲状腺癌的发生约占全身恶性肿瘤的1%,在神经内分泌系统恶性肿瘤中占90%以上。据统计大约5%-10%的人在1生中可能会发现具有临床意义的甲状腺结节［９］。在所有恶性肿瘤中，甲状腺癌预后相对较好。影响甲状腺癌预后的因素很多，包括病理类型、临床分期、年龄、治疗等。如果能够找到较好评价甲状腺癌预后的分子生物学标记，就可以通过对该标记的检测，判断甲状腺癌的预后，从而合理制定甲状腺癌患者复诊时间，指导临床治疗。      EG-1可能通过激活MAPK、c-Src等信号传导通路，增强甲状腺癌的恶性行为，但具体的作用机制尚未明确。本研究发现，甲状腺癌组织中存在EG-1基因的表达，且与结节性甲状腺肿组织存在统计学差异（χ2=10.720, P<0.05）。通过单因素生存分析，甲状腺癌患者EG-1基因表达组与未表达组的生存率存在明显统计学差异（P=0.025），多因素Cox 比例风险回归分析认为EG-1基因可以作为甲状腺癌预后的独立危险因素（P=0.008，RR=4.947）。本研究结果显示，病理类型、年龄、组织学分级、肿瘤分期、肿瘤包膜完整性、淋巴结有无转移、有无血管浸润均影响甲状腺癌预后；通过AMES、AGES 和MACIS评分预测甲状腺癌的预后是可行的；EG-1基因可能成为评价甲状腺癌患者预后的较好的分子生物学标志。通过检测该基因的表达，有助于确切评价甲状腺癌患者的预后，制定合理的复诊时间。
　　【参考文献】
　　[5] Sobin LH, Wittekind Ch. TNM classification of malignant tumors[M]. 6th ed. New York: Wiley-Liss, 2002: 52-56.
　　[6] Cady B, Rossi R. An expanded view of risk-groupdefinition in differentiated thyroid carcinoma[J]. Surgery, 1988,104: 947-953.
　　[8] Hay ID, Bergstralh EJ, Goellner JR, et al. Predicting outcome in papillary thyroidcarcinoma: Development of a reliable prognosticscoring system in a cohort of 1779 patients surgically treated at one institution during 1940 through 1989[J]. Surgery, 1993,114:1050-1058.